搜索
 > 应用共享 >单抗药物血药浓度测定

单抗药物血药浓度测定

2196  |  
2018-03-30 16:37

在过去的数十年间,单克隆抗体 (mAb) 作为一类药物应用在疾病的治疗中发挥了重要作用。随着人们对疾病相关生物分子理解的增加,单抗生产技术的进步,越来越多的分子靶点被鉴定出来用于药物治疗,促进了众多单抗应用的肿瘤免疫靶向治疗时代的到来。随着“精准医疗”的不断推进,以治疗性单抗血药浓度检测作为患者个体化治疗的用药参考将是一个趋势。

目前,用于单抗浓度测定的方法包括固相酶联免疫吸附测定 (ELISA),流体液相放射免疫测定,流体液相移动性测定和报告基因测定,最常用的技术是ELISA。下面介绍三种有代表性的用于定量治疗性抗体的免疫实验方法。

三种检测方法对比(以PD-1抗体为例):

检测方法 包被 样品 二抗 优势 劣势 案例分享
间接法 PD-1 待检血样 Goat anti-human IgG 方法开发简单 非特异背景较高 案例一
抗体竞争法 PD-1 待检血样和标记的竞争抗体混合物 SA-HRP 非特异背景低 方法开发较复杂 案例二
配体竞争法 PD-L1 待检血样和标记的PD-1混合物 SA-HRP 非特异背景低 线性范围较窄,方法开发较复杂 案例三

如果您有其他相关案例分享或者对以下某个案例细节感兴趣,欢迎发送邮件至PK@acrobiosystems.com

案例详情

案例一、间接法测定PD-1抗体药血药浓度

返回案例汇总

检测方法:ELISA

检测仪器:BMG CLARIOstar酶标仪

样本信息:PD-1抗体药血清样本

主要试剂:

  • Human PD-1蛋白 (ACROBiosystems, Cat.No. PD1-H5221);
  • Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Human IgG, Fcγ Fragment Specific (Jackson, Cat.No. 109-035-098)
  • 简要流程:

    • 1. 将human PD-1 (ACROBiosystems, Cat.No. PD1-H5221) 以0.1ug/well的浓度包被到板上;
    • 2. 将PD-1抗体药梯度稀释到人血清中;
    • 3. 将稀释过的PD-1抗体药加到孔板中;
    • 4. 加入Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Human IgG二抗;
    • 5. TMB显色。

    检测结果:为避免非特异背景干扰,该方法血清样本进行了1000倍稀释,因此血清样本检测范围0.19-6.25ug/ml,检测灵敏度0.19ug/ml(见图1)。

    图1. 间接法测定PD-1抗体药血药浓度标准曲线

    相关产品:

    PD1-H5221 (Human PD-1 / PDCD1 Protein (HPLC-verified)) 点击咨询报价

    案例二、抗体竞争法测定PD-1抗体药血药浓度

    返回案例汇总

    检测方法:ELISA

    检测仪器:BMG CLARIOstar酶标仪

    样本信息:PD-1抗体药血清样本

    主要试剂:

  • ELISA Assay Kit for Anti-PD-1 h-mAb in Human Serum (ACROBiosystems, Cat.No. EPH-V1);
  • 简要流程:

    • 1. 将human PD-1以0.1ug/well的浓度包被到板上;
    • 2. 将梯度稀释的PD-1抗体药和biotinylated anti-PD-1 antibody混合(血清终浓度10%);
    • 3. 将混合物加到孔板中;
    • 4. 加入Streptavidin Protein, HRP二抗;
    • 5. TMB显色。

    检测结果:该方法血清样本检测线性范围0.78-25ug/ml,检测灵敏度0.78ug/ml(见图2)。

    图2. 抗体竞争法测定PD-1抗体药血药浓度标准曲线

    相关产品:

    EPH-V1 (ELISA Assay Kit for Anti-PD-1 h-mAb in Human Serum) 点击咨询报价

    案例三、配体竞争法测定PD-1抗体药血药浓度

    返回案例汇总

    检测方法:ELISA

    检测仪器:BMG CLARIOstar酶标仪

    样本信息:PD-1抗体药血清样本

    主要试剂:

  • Human PD-L1蛋白 (ACROBiosystems, Cat.No. PD1-H5258);
  • Biotinylated human PD-1 (ACROBiosystems, Cat.No. PD1-H82F2);
  • Streptavidin Protein, HRP (Thermo, Cat.No. 21126)
  • 简要流程:

    • 1. 将human PD-L1 (ACROBiosystems, Cat.No. PD1-H5258) 以0.2ug/well的浓度包被到板上;
    • 2. 将梯度稀释的PD-1抗体药和biotinylated human PD-1混合(血清终浓度10%);
    • 3. 将混合物加到孔板中;
    • 4. 加入Streptavidin Protein, HRP二抗;
    • 5. TMB显色。

    检测结果:该方法血清样本检测线性范围1.565-6.25ug/ml,检测灵敏度1.565ug/ml(见图3)。

    图3. 配体竞争法测定PD-1抗体药血药浓度标准曲线

    相关产品:

    PD1-H5258 (Human PD-L1 / B7-H1 Protein, Fc Tag, low endotoxin) 点击咨询报价
    PD1-H82F2 (Biotinylated Human PD-1 / PDCD1, His Tag & Fc Tag, Avi Tag (Avitag™)) 点击咨询报价

    案例分析对比

    间接法ELISA测定pd-1.png
    竞争法ELISA测定pd-1.png
    图4. 比较间接法和抗体竞争法检测不同人给药前血清样本中的PD-1抗体浓度。
    案例名称 线性范围(ug/ml) 灵敏度(ug/ml) 特异性
    案例一:间接法测定PD-1抗体药血药浓度 0.19-6.25 0.19 非特异背景干扰较高
    案例二:抗体竞争法测定PD-1抗体药血药浓度 0.78-25 0.78 非特异背景干扰非常低
    案例三:配体竞争法测定PD-1抗体药血药浓度 1.565-6.25 1.565 非特异背景干扰非常低

    比较上文三个案例,案例三配体竞争法线性范围较窄,导致样本稀释过于繁琐,且准确性较低。案例一间接法和案例二抗体竞争法相比,线性范围接近,灵敏度接近。但是,案例一间接法所用二抗为Goat anti-human IgG,在血清中会有非特异性背景干扰,而案例二抗体竞争法使用和生物素结合的Streptavidin Protein, HRP作为检测二抗,避免背景干扰(见图4)。

    为了支持上述研究,ACROBiosystems公司采用案例二的抗体竞争法,开发了一系列ELISA血药浓度定量检测试剂盒,用于测定临床前和临床血液样本中的抗体药浓度。该系列产品经证实具有低背景、通用快速、高批间一致性等卓越的实验表现。

    ×

    消息提示

    请输入您的联系方式,再点击提交!

    确定