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【病理干货】组织湿标本处理流程1-组织样本固定

2024-02-22 13:54    浏览量:160

组织湿标本处理流程1-组织样本固定

在药物开发过程中,病理技术 (Pathology) 可用于药物早期研发阶段和临床前阶段,而在临床阶段则属于诊断标准,有助于确定癌症标志物的空间分布,通过伴随诊断精准筛选用药人群并评估药物的治疗效果。病理检测过程中,正确的标本固定是制成高质量切片的第一步,而是否能对组织进行标准化处理则体现了病理检测人员的技术水平,对后续病理诊断结果好坏也有很大影响。

01
什么是组织样本的固定

活体组织一旦停止血液循环和物质代谢,就会因物质代谢障碍产生一系列的生物化学和组织化学的改变。固定是通过让组织中所有细胞和细胞外结构迅速死亡,以避免溶酶体的破坏作用,保持离体组织细胞与存活时形态相似,并防止氧化、腐败,以保存蛋白质与核酸的基本结构。

固定是保存组织器官,用于病理诊断、研究等所必须得步骤。

固定具有渗透、杀死细胞及微生物和固化组织等多方面的作用。

固定是后续所有处理步骤的基础。若组织固定不好,后续的制作过程中无法弥补,对后续诊断会有很直接的不良影响,因此正确的固定,是整个组织处理过程的一个重要环节。

02
样本固定的一般原则
  • ● 及时固定:固定的组织越新鲜越好,可以更有效的保存组织细胞的形态和抗原性;

  • ● 及时修整:对于大标本,剖检时应及时在取材部位附近剖开并且进行相关组织形态固定(如需),以便让目标部位及时被固定;

  • ● 固定液:一般使用10%中性福尔马林或4%中性多聚甲醛,特殊的操作流程或染色方法则需要不同的固定液来进行处理;

  • ● 固定液量:一般情况下,固定液量应为组织总体积的5-10倍;

  • ● 固定时间:一般情况下,固定时间为24-36小时,不宜超过48小时。如未能及时进行脱水步骤,则可转到70%乙醇中暂存;

  • ● 固定的温度:一般情况下,组织固定应在室温(19~27°C)下进行,如在2~8°C则应相应延长固定时间;

  • ● 如未使用自动化设备,则不定时搅拌使固定液进行循环。

03
常见固定液介绍
  • ● 10%中性福尔马林:甲醛是一种易挥发且有刺激性气味的液体,商品化甲醛浓度一般在37%~40%,福尔马林则一般使用缓冲液稀释商品化甲醛10X,所以福尔马林通常甲醛浓度为3.7%~4%。用缓冲液调控固定液的PH值为7.0,对后续染色影响相对较小;

  • ● 4%多聚甲醛:4%多聚甲醛主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成,pH为7.4。这种固定液适合于绝大多数组织和细胞的固定,是免疫组织化学和培养细胞固定中最常用的固定液之一;

  • ● 丙酮:丙酮是一种易挥发的无色液体。丙酮作为固定液,适用于脑组织和冷冻组织。部分石蜡组织如固定不理想,可用丙酮进行二次固定用。丙酮也可替代无水乙醇做脱水机使用,适用于脂类的组织;

  • ● AF:由95%乙醇和甲醛配置,常用于皮下组织中肥大细胞的固定。后续可直接用90%乙醇脱水;

  • ● AFA:由95%乙醇、甲醛和冰醋酸配置,因添加冰醋酸使得该固定液穿透力强,固定快,常用于快速脱水固定和冷冻切片快速固定。如常规石蜡切片因固定不理想而染色效果不好,可在染色区用AFA固定5min,可改观染色效果。

组织湿标本处理流程1-组织样本固定

常见固定液的穿透力



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