任何组织的切片,如果不进行染色就看不到组织的细微结构、看不到细胞核,无法分辨出肿瘤的良恶性,不能向临床医生提供诊断依据。所以染色在病理组织形态学的诊断、科研和教学工作中具有重要的实用价值。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。
苏木精-伊红染色法 (hematoxylin-eosin staining),简称HE染色法,石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
- 二甲苯
- 梯度乙醇
- 苏木素染液
- 伊红染液
- 分化液
- 返蓝液
- 中性树胶固封剂
1. 脱蜡要彻底。一般脱蜡彻底的切片呈透明状,脱蜡的彻底与否取决于环境温度、脱蜡液温度、脱蜡时间、切片数量等;
2. HE各染液的染色时间应根据组织类型不同、样本新旧、固定不同、环境温度不同、染液使用情况不同、切片厚度及切片数量来调整。一般来说新鲜组织易着色,陈旧组织较难着色;
3. 染色过程中水洗需注意自来水的酸碱性。如自来水呈酸性,则易使苏木素脱色,如自来水呈碱性,则易加快水溶伊红在乙醇中的脱色,应根据染液情况和自来水情况调整冲洗时间;
4. 脱水时,应控制切片在低浓度乙醇的时间,低浓度乙醇对伊红有洗脱作用;
5. 根据不同苏木素,是否需要分化反蓝,以及分化反蓝的时间均不相同,水溶或淳溶的伊红着色效果也不相同,在染色过程中进行镜检能达到更好的染色效果;
6. 中性树胶固封剂浓度要适中,浓度高时,不易散开、易产生气泡,浓度低时,易溢出切片、待二甲苯挥发后树胶易分布不均产生空泡;
7. 染色应在通风橱进行,避免或减少试剂对人体的伤害。
- 二甲苯3缸,浸染5min;
- 无水乙醇2缸,浸染2min;
- 75%,85%,95%梯度乙醇各1缸,浸染1min;
- 自来水浸1min;
- 苏木素浸染5-8min;
- 自来水冲洗;
- 分化:根据分化液不同,数秒或数分钟不等;
- 自来水冲洗;
- 反蓝:根据返蓝液不同,数秒或数分钟不等;
- 自来水冲洗;
- 伊红浸染1-5min;
- 自来水冲洗;
- 75%、85%、95%梯度乙醇各1缸,浸染10-20s;
- 无水乙醇2缸,浸染1-2min;
- 二甲苯2缸,浸染2min;
- 中性树胶固封。
- 组织完整;
- 厚薄均匀;
- 染色清晰,对比度高;
- 无明显褶皱、破损、刀痕、裂隙等;
- 着色无污染;
- 固封适中,无气泡、空腔,透明度好。
● 组织本身如凝血块、血栓、分泌物等,干涸或过硬的组织及组织破碎等,染色时易脱落。可尝试使用防脱片;
● 组织脱水、透明不佳,石蜡未完全浸透,组织较软,切片脱蜡时收缩,染色时又膨胀,进而易脱片。可尝试重新脱水;
● 组织脱水浸蜡时间过长或温度过高,组织过硬、过脆,切片时不易完整,且易脱片。可尝试在切面敷乙醇或乙醇甘油后切片。
● 组织固定不当,固定好的部位着色清晰,未固定好的部分着色模糊;
● 组织脱水不佳,部分组织内含水,导致浸蜡不充分,造成部分染色出现灰染可尝试重新脱水;
● 切片薄厚不均或有横纹;
● 切片脱蜡不充分,含蜡部分着色浅或不着色;
● 切片上有气泡,导致与染液接触不充分。
● 展片台,水面有杂质或碎屑;
● 切片机刀头有组织碎屑或杂质,易粘黏到蜡带上;
● 染色液中有污染、碎屑、色素颗粒、沉渣等。
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