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【病理干货】FFPE石蜡制片常见问题

2024-05-23 10:35    浏览量:239
 

湿组织经取材、脱水、石蜡包埋后制成组织蜡块,再用切片机制作切片的过程称为石蜡切片。一般切片厚度为3~5μm,脑组织稍厚一般切5-8μm,切片设备不同,可切的厚度不同。如需要观察病变的发展,则需做连续切片。由于石蜡组织便于长期保存,因此石蜡切片仍是所有切片制作中最常用的方法之一。

常见的石蜡切片机

现在常用的切片机为轮转式切片机,轮转式切片机现又可分为:纯手工轮转式石蜡切片机,半自动石蜡切片机,全自动石蜡切片机。切片机还有手工推拉式切片机,电动推拉式滑动切片机,震动切片机等。

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  • 轮转式切片机:轮转式切片机是目前最常用的一种切片机,该机型操作简单,性能稳定,切片厚度准确。

  • 平推式切片机:平推式切片机也称为推拉式切片机。平推式切片机除了适用于常规石蜡组织外,也适用于大组织切片或硬组织切片,有点为切片平整,无褶皱且可以根据组织大小进行适配。

  • 震动切片机:采用高频震动的方式进行切片,适用于新鲜脑组织或神经组织制片。

石蜡切片辅助设备

石蜡切片辅助设备在组织学研究和临床诊断中起着至关重要的作用,可以帮助实验室或医疗机构高效地处理和分析组织样本,为科研和临床工作提供重要支持。

LEICA- HistoCore Arcadia C

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  • 冷台:用于冷冻石蜡蜡块,增加组织硬度,利于切片。稳定一般设置为-10°C~-5°C。如没有冷台也可以用冰盒替代。

  • 摊片机用于石蜡切片的摊展,内置实验室用水,温度设置取决于组织不同及脱水的情况,一般设置43-47°C。

  • 烤片机:用于石蜡切片的进一步伸展烘烤。温度设置52°左右时,对石蜡切片的小皱褶有延展作用,温度设置为60°C左右时可用于切片的烤片。

石蜡制片切片刀

切片刀大体上分为两类,一类是传统一体式切片刀,一类是一次性切片刀片。

01
传统切片刀:
  1. 平凹形刀:可应用与平推或轮转切片机,最为常见。 

  2. 深平凹形刀:主要应用于火棉胶切片。

  3. 平楔形刀:可应用与石蜡、大组织、冰冻切片。

  4. B、D形刀:B形刀主要用于脱钙后骨组织,D形刀主要用于不脱钙骨组织。

02
一次性切片刀片

一次性切片刀片是近些年主要应用的切片工具,目前常见的切片机都会配置刀架,专门适配一次性切片刀片。与传统切片刀相比,一次性切片刀不用进行打磨,锋利度更好,更有利于切片的平整稳定。目前市面上一次性切片刀种类很多,针对不同的样本类型,选择合适的刀片能更好的保证切片的质量,以羽毛刀片举例:

  1. R-35:主要应用于常规病理切片。

  2. S-35:主要应用与软组织切片。

  3. A-35:主要应用与推拉式切片机。

  4. C-35:主要应用与冰冻切片机

  5. N-35:主要应用与骨组织切片。

FFPE切片中的常见问题

  1. 组织前处理不佳,导致切片困难,如不完整、易碎、粘附等。前处理应:固定及时彻底,取材规范,组织大小适中,薄厚均匀。

  2. 切片呈空的及破碎的现象,多见于淋巴及软组织。粗修时应进刀缓慢,切片时应细修数刀,增加蜡块表面湿润度。

  3. 切片厚薄不均,多数由蜡块固定不牢或刀头刀架固定不紧导致,组织过硬或脱水过度也会引起这种情况。检查样本架、刀头、刀架等,如是硬组织则可使用表面脱钙发软化。也可是在切片时,在样本表面沾一点温水,增加蜡块湿润度。

  4. 切片时中间出现糖心,遇水易碎,无法展片。多见于组织固定不佳,导致脱水不彻底。可将蜡块退回浸蜡或重新脱水。

  5. 组织过硬,切片质量不佳。可在蜡块表面涂抹乙醇、乙醇-苯酚、或温水,增加蜡块湿润度。

  6. 脱钙不彻底,组织硬且脆,切出的样本组织破碎、折叠等。可将蜡块表面浸入10%~20%盐酸溶液中几分钟后再切片。

  7. 切片时组织散片,出现密集的细小裂纹。可能是蜡块冷冻过度、织前处理不佳遇水开裂、展片水温过高。

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