通过在哺乳动物细胞中共表达目标膜蛋白与病毒结构蛋白,可在病毒样颗粒(VLP)出芽过程中将膜蛋白天然嵌入脂双层。该方法能够保留膜蛋白的天然构象、翻译后修饰及正确的膜朝向,并提供完全不含去垢剂的微环境。得益于其重复的多价展示与强免疫原性,基于VLP的膜蛋白产品适用于免疫、抗体发现与筛选中的结合分析(如ELISA)及基于细胞的检测(如FACS)等应用场景。
通过温和去垢剂胶束提取、专业增溶处理及严格亲和纯化,该工艺可在下游流程中最大限度保留全长跨膜蛋白的天然跨膜构象。所获得的去垢剂增溶膜蛋白具有高纯度、准确定量及良好的生物活性保持率,且不含无关膜杂质与外源支架蛋白,适用于免疫、抗体发现与筛选中的结合分析(如ELISA)以及亲和力测定(如SPR和BLI)等应用场景。
将纯化后的Detergent膜蛋白通过自组装过程,重新组装至由MSP1D1膜支架蛋白稳定的合成磷脂双分子层中,同时彻底去除去垢剂,从而构建一个稳定且完全不含去垢剂的环境,完整保留膜蛋白的天然构象与生物活性。该方法所得产物具有极佳的均一性,且与基于细胞的检测(如FACS)以及抗体发现与筛选中的结合分析(如ELISA)高度兼容。
通过温和、非破坏性的提取方法,在不破坏或扰动天然膜结构的前提下,直接从细胞膜中分离出全长跨膜蛋白及其周围的天然磷脂环境。该方法完整保留了膜蛋白的天然构象与原始脂质环境,形成由细胞膜磷脂组成的稳定纳米盘,未使用去垢剂进行膜蛋白的提取和溶解,未破坏细胞膜结构,从而确保生物活性的完好保持。所获得的产物适用于基于细胞的检测(如FACS)以及抗体发现与筛选中的结合分析(如ELISA)等应用场景。
免疫原:Claudin 18.2 VLP (Cat. No. CL2-H52P7)
方案1(红线):用VLP骨架 (Cat. No. VLP-N5213) 筛选,表征血清中抗VLP骨架的抗体滴度。
方案2(黑线):用Claudin-18.2 VLP (Cat. No. CL2-H52P7) 筛选,表征血清中抗Claudin-18.2以及抗VLP骨架的抗体滴度。
方案3(蓝线):用Claudin-18.2 Detergent(DDM) (Cat. No. CL2-H5587) 筛选,表征血清中抗Claudin-18.2的抗体滴度。
免疫原:Claudin 18.2 Detergent (DDM) (Cat. No. CL2-H5587)
方案1(红线):用Claudin-18.2 VLP (Cat. No. CL2-H52P7) 筛选,表征血清中抗Claudin-18.2 以及抗VLP骨架的抗体滴度。
方案2(黑线):用Claudin-18.2 Detergent(DDM) (Cat. No. CL2-H5587) 筛选,表征血清中抗Claudin-18.2的抗体滴度。
免疫原:Claudin 18.2 Nanodisc-pro (Cat. No. CL2-H5589)
方案1(黑线):用Claudin-18.2 Nanodisc-pro (Cat. No. CL2-H5589) 筛选,表征血清中抗Claudin-18.2以及抗Nanodisc-pro骨架的抗体滴度。
方案2(红线):用Claudin-18.2 VLP (Cat. No. CL2-H52P7) 筛选,表征血清中抗Claudin-18.2 以及抗VLP骨架的抗体滴度。
方案3(蓝线):用Nanodisc-pro (Cat. No. APO-H5143)骨架筛选,表征血清中抗Nanodisc-pro骨架的抗体滴度。
抗体对靶细胞 (Claudin-18.2) 的特异性结合。 与同型对照(Isotype control, 黑线)相比,Anti-Human Claudin 18.2 抗体(红线)在表达 Claudin-18.2 的靶细胞上产生了显著的荧光信号右移,表明具有良好的结合活性。
抗体对阴性对照细胞 (Claudin-18.1 ) 的交叉反应性检测。 该抗体(红线)在表达 Claudin-18.1 的阴性对照细胞上,其信号峰与同型对照(黑线)重叠,表明抗体特异性强,无明显的同族蛋白交叉反应。
抗体对宿主细胞 (HEK 293) 的背景结合检测。 该抗体(红线)与同型对照(黑线)在HEK 293空白宿主细胞上的信号峰完全重叠,表明抗体对背景细胞无非特异性结合。