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CRISPR-Cas技术：靶向基因组编辑

CRISPR-Cas技术是继ZFN、TALENs等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术，引起了极大的关注。ZFN、TALENs靶向基因组修饰方法，设计成本高且耗时，限制了它们的广泛使用，特别是对于大规模、高通量研究。CRISPR-Cas系统能够实现高度灵活和特异性的靶向，可以进行修改和重定向，成为现有基因编辑和基因修饰里面效率最高、最简便、成本最低、最容易上手的技术之一，已被广泛应用于肿瘤相关基因功能的研究、肿瘤动物模型的建立和药物靶点的探索，极大地提高了人们对肿瘤基因组学的认识。

CRISPR-Cas技术：靶向基因组编辑

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ACROBiosystems聚焦于细胞与基因治疗领域，作为领先的重组蛋白供应商隆重推出包括CAS9、CAS12a等CAS系列蛋白，主要用于定点基因编辑等，以提供高编辑效率。

产品特点：
高酶活经过体内/体外实验验证：体外切割效率＞90%，便于用 CRISPR 技术进行基因组编辑；
提供高浓度的 CAS-9 核酸酶：10mg/ml 高浓度版本，可以用于困难基因编辑条件的优化；
高纯度：通过对纯化工艺和制剂工艺摸索，获得高纯度蛋白，SDS-PAGE & MALS检测纯度>90%；
无RNA酶残留：生产过程严格控制RNA酶污染；
NLS核定位信号，能帮助蛋白递送到细胞核，提高基因组DNA的编辑效率；
知识补充

原核生物和感染它们的病毒之间的相互作用不断演化，导致了CRISPR-Cas系统的广泛多样性。人们一般将CRISPR-Cas系统分为两类（1类和2类）。迄今为止，大多数研究人员使用的都是2类CRISPR-Cas系统，在该类中，研究最多的是Ⅱ型，也就是CRISPR-Cas9系统。

CRISPR-Cas9相关应用场景
- CAR-T治疗中的应用：
1）产生通用异基因CAR-T细胞；2）增强CAR-T细胞功能
- TCR-T细胞治疗中的应用：
把内源性TCR α和β 基因替换成具有人工肿瘤特异性TCR序列的基因
- 免疫检查点信号通路的抑制
- 肿瘤免疫治疗新靶点的筛选
CRISPR-Cas9 作用机制

CRISPR-Cas9 系统只有三个必需的组件（Cas9 以及 crRNA 和 trRNA）。可以在各种真核细胞中进行靶向基因切割和基因编辑，通CRISPR-Cas9调控机理图：通过非同源末端连接 (NHEJ) 或同源定向修复 (HDR) 内源性修复双链 DNA 断裂[1]过人工设计的 sgRNA（guide RNA）来识别目的基因组序列，并引导 Cas9 蛋白进行有效切割 DNA 双链，形成双链断裂，双链断裂可以通过细胞修复机制使用非同源末端连接或同源定向修复机制进行修复，最终达到对基因组DNA 进行修饰的目的，可以将编辑定向到几乎任何基因组位点，实现对基因功能进行高通量的研究。

CRISPR-Cas9调控机理图 CRISPR-Cas9调控机理图：通过非同源末端连接 (NHEJ) 或同源定向修复 (HDR) 内源性修复双链 DNA 断裂[1]

产品列表

验证数据

高纯度：经SEC-HPLC验证，纯度＞95%
高纯度：经SEC-HPLC验证，纯度＞95%

The purity of GMP GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease (Cat. No. GMP-CA9S18) was greater than 95% as determined by SEC-HPLC.

高活性：质粒切割效率＞90%；人原代T细胞TCR敲除＞95%；在HEK293、iPSC及原代T细胞（B2M）中均表现高效切割
高活性：质粒切割效率＞90

Different amounts of Cas9 were incubated with the same amount of excess gRNA and plasmid for 60 minutes at 37°C. When using 400-200 ng ACRO's Cas9, the cutting efficiency is greater than 90% (QC tested). In comparison, when using a 200 ng CAS9 from company T, the cutting efficiency is only about 50%

高活性：质粒切割效率＞90

The TCR knockout efficiency with GMP GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease in human primary T cells, GMP GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease achieved over 95% knockout efficiency.

高活性：质粒切割效率＞90

The cleavage efficiency in HEK293 cell 72 hours after electroporation of GMP GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease RNP.

高活性：质粒切割效率＞90

The cleavage efficiency in iPSC 72 hours after electroporation of GMP GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease RNP.

高活性：质粒切割效率＞90

The knockout efficiency for B2M in primary T cell was measured by Flow Cytometry.

稳定性：37°C下酶活性稳定维持35天，批间一致性良好
稳定性：37°C下酶活性稳定维持35天，批间一致性良好

Enzymatic activity assay demonstrates that GMP GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease (Cat. No. GMP-CA9S18) is stable at 37°C for 35 days

稳定性：37°C下酶活性稳定维持35天，批间一致性良好

Enzymatic activity assay demonstrates batch-to-batch consistency between Acro's GMP and PG Cas9.

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参考文献

  • 1. Westermann L, Neubauer B, Köttgen M. Nobel Prize 2020 in Chemistry honors CRISPR: a tool for rewriting the code of life. Pflugers Arch. 2021 Jan;473(1):1-2.
  • 2. “魔剪” CRISPR/Cas9，你 get 到了吗？
  • 3. CRISPR/Cas9基因编辑在肿瘤免疫治疗中的应用
  • 背景
  • CRISPR-Cas技术：靶向基因组编辑
  • 产品列表
  • 验证数据
  • 参考文献