2021年7月11日，ACROBiosystems的研发高级经理秦丽丽博士在金鸡湖新药领袖峰会暨第三届全球生物医药前沿技术大会上分享了《多次跨膜蛋白的研发策略》的精彩主题报告，现场互动反响热烈，大家对ACRO专门搭建的多次跨膜靶点蛋白平台和相关产品全长Claudin18.2和全长CD20都颇感兴趣。会后， PPT和问题收集一经分享就收到了大家的积极反馈。为解决大家的疑惑，7月20日，我们特意邀请秦博在膜蛋白技术分享交流群”进行了答疑，小编在这里汇总了Q&A，解决你对多次跨膜靶点蛋白的诸多疑问，快来看看吧~（加文末小助手微信可申请进群哦~）
想购买Claudin18.2，不知道怎么挑选，秦博士能从应用科学的角度能给支支招吗？做免疫和抗体筛选。
我们制备的Claudin18.2有VLP平台下的版本，也有DDM/CHS平台下的Claudin18.2版本。两款都是可以的。不过免疫的话也可以优先选择VLP版本的，因为本身VLP可以提高免疫原性。筛选的话两款都是可以，如果想要得到准确的亲和力数据，推荐DDM/CHS版本（即去垢剂版本）。
相比其他非Nanodisc产品，Nanodisc有什么好处吗？
Nanodisc-膜蛋白与去垢剂-膜蛋白相比，的确有不同。首先，原理上，Nanodisc膜蛋白是将膜蛋白除去去垢剂之后组装在类细胞膜的Nanodisc上。其次，应用上，我们都知道，去垢剂会溶膜从而对细胞产生损伤，Nanodisc版本的膜蛋白因不含去垢剂，可以进一步扩展到用于细胞试验、CAR阳性率检测，应用范围是更广的。另外，我们ACRO使用的Nanodisc技术已经获得专利持有方的授权，各位在研发过程中是可以放心使用的。
你们一直强调全长，意义大吗？我的理解是只要有胞外区就行，毕竟抗体与抗原结合在胞外。
多次跨膜蛋白在细胞膜上多次跨越，在胞外形成多个胞外区，比如Claudin18.2、CD20、CD133都有两个ECL（extracellular loops），每个ECL都有特定功能甚至会相互影响。全长可以保证蛋白构象天然完整，而且ECL展现完全，帮助筛选靶向多次跨膜蛋白抗原的理想抗体。给大家看下面两张图，全长的意义就显而易见了，结构完整，功能上也有保证。这么看，全长也不是我们ACRO一直在强调全长，而是客户需要全长的多次跨膜蛋白，满足客户需要的产品是ACRO的初衷。我们也比较过，单独的胞外ECL区蛋白活性确实比全长蛋白差。
全长的膜蛋白，有VLP和Nanodisc怎么去除非特异抗体？
这个问题非常好。非特异抗体的影响不容忽视，使用VLP和Nanodisc平台下的膜蛋白的确可能产生非特异抗体，我们这两个平台均有对应的用于反筛去除非特异抗体的空白对照：VLP-膜蛋白有同型对照产品空白VLP；Nanodisc有两款MSP1D1空白产品，其中一款MSP1D1作为tag free 膜蛋白的同型对照，如果使用生物素化的Nanodisc-膜蛋白，另一款MSP1D1可以作为同型对照。
PS：小编为大家整理了秦博提到的同型对照产品信息，方便大家按需查看哦~
这里提到的纳米颗粒抗原展示平台是指针对免疫原性低的靶点（通常是低分子量的靶点蛋白），我们提供的增强免疫原性的纳米颗粒展示平台可以解决这个问题。
VLP和nanodisc产品稳定性如何。冷冻长时间保存可以吗？
VLP和Nanodisc本身的稳定性是很好的，是可以在-70°C长期保存的。
VLP相关蛋白能适合冻干保存吗？VLP的用于免疫有什么注意事项？比如能否乳化，对佐剂类型有没有要求？
包膜VLP产品我们目前都是液体-70°C保存，干冰发货；非包膜VLP我们是冻干保存的。VLP免疫主要是需要注意佐剂量的选择，因为VLP本身是可以增强免疫原性的，跟常规蛋白不同。
如何确认VLP-Claudin18.2表达的是该目标蛋白，纯度如何评估的呢？您产品上的电镜图片，怎么区别颗粒上是不是有该蛋白?
Claudin18.2-VLP 我们会通过anti-Claudin18.2特异性的抗体进行检测验证。纯度我们通过电泳/HPLC/DLS电镜进行评估。常规负染电镜因分辨率低是没办法看到VLP上是否有Claudin18.2的。
看ppt，CD24，PD-1等，也是VLP产品。和Claudin18.2是一样的吗？包膜vlp和非包膜是啥区别?
CD24，PD-1本身属于可溶蛋白，不是多次跨膜蛋白，所以使用的是非包膜的VLP；而多次跨膜蛋白因为有疏水跨膜区，所以需要使用包膜VLP；两者的区别就是VLP的表面是否有磷脂双分子膜。
这个问题可以联系群内小助手，后续销售同事会帮助解答。
定制的话，VLP版本的膜蛋白预计需要6-8周；DDM/CHS去垢剂版本的膜蛋白需要进行多次跨膜靶点蛋白表达纯化条件摸索和去垢剂筛选，所以开发周期更长一些，需要8周以上；Nanodisc版本的膜蛋白是DDM/CHS的周期上再加4周左右。
依托针对多次跨膜靶点蛋白研发搭建的VLP技术平台、膜蛋白去垢剂平台、Nanodisc平台，ACRO具有领先于同类公司更全面的解决方案、更广泛的应用场景、更多种的产品选择的三大优势，全面实现了CD20、Claudin18.2、GPRCSD、CCR5、CCR8等多次跨膜蛋白的“全长自由”，保证了多次跨膜蛋白的天然构象，经ELISA验证具备高生物活性和高批间一致性，研发专家们可以根据不同应用场景选择适合的多次跨膜蛋白。
ACRO膜蛋白技术分享交流群聚焦多次跨膜靶点蛋白研发、应用等相关主题的讨论，热点文章分享和解读，欢迎大家热烈参与讨论、积极分享。
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近期我们会在群里分享第三届全球生物医药前沿技术大会部分演讲PPT供大家学习哦~请持续关注群内消息。
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