Claudin18.2-VLP，CAR阳性率检测应用案例

在CAR-T细胞治疗领域的研究中，实体瘤相关的治疗方法开发一直是亟待突破的方向。Claudin18.2在实体瘤上的靶点优势使得研究人员在CAR-T细胞免疫治疗研究领域对其进行了广泛的布局。例如， 2021年11月15日，细胞治疗企业科济药业发布公告，其开发的全球首款Claudin18.2 CAR-T候选产品CT041已被欧洲药品管理局（EMA）授予优先药物（PRIME）资格，用于治疗胃癌/胃食管结合部癌。值得一提的是，这也是全球首个入选PRIME计划的实体瘤CAR-T产品。

2022年5月9日，《Nature-Medicine》期刊发表的CT041治疗胃肠道癌症的I期临床试验数据（NCT03874897）结果显示：所有37例晚期消化道肿瘤患者的客观缓解率（ORR）和疾病控制率（DCR）分别为48.6%（95%CI，31.9，65.6）和73.0%（95%CI，55.9，86.2），安全性方面副反应整体可控，耐受性良好。此次临床数据展现了Claudin 18.2 CAR-T细胞疗法攻克实体瘤的突破性进展。

靶向Claudin18.2 CAR-T领域临床研究

数据来源：药渡,clinicaltrials.gov,截止2022/1/20

专为Claudin18.2 CAR检测设计的Claudin18.2-VLP（Cat. No. CL2-HF218）

ACROBiosystems专门搭建了基于HEK293表达系统的VLP技术平台，通过包膜VLP技术，将聚集在细胞膜表面的构象完整的全长四次跨膜蛋白Claudin18.2，组装在类病毒颗粒表面，从而获得可溶性的、高浓度的、正确折叠的完整Claudin18.2，Claudin18.2-VLP（Cat. No. CL2-HF218）是一款专为CAR检测设计的产品，在C端带有一个GFP标签，推荐用于CAR阳性率检测。

Claudin18.2-VLP（Cat. No. CL2-HF218）为CAR检测“出彩”【应用案例】

检测方法：流式细胞术

检测仪器：BD FACS Celesta流式细胞分析仪 (BD Biosciences)

样本信息：Anti-Claudin18.2 CAR-293细胞

主要试剂：

• - GFP标签的Claudin18.2-VLP蛋白（Fluorescent Human Claudin18.2 Full Length Protein-VLP (HEK293) ACROBiosystems, Cat. No. CL2-HF218）
• - VLP蛋白（Fluorescent Virus-Like Particle (VLP) isotype control, ACROBiosystems, Cat. No. VLP-NF2P4）

简要流程：

• 1． 用含10% FBS的DMEM培养基在37℃，5% CO2培养箱中培养Anti-Claudin18.2 scFv-过表达293细胞。
• 2． 收集细胞，用FACS缓冲液清洗细胞一次。
• 3． 进行细胞计数及存活率测定，等分细胞悬液，每管 2×10⁵ 活细胞。
• 4． 用FACS缓冲液将Human Claudin18.2蛋白(Cat. No. CL2-HF218)稀释成3 μg/mL浓度后，取100 μL稀释后的样品溶液加入细胞悬液管中。混合均匀，4℃孵育60分钟。
• 5． 用FACS缓冲液洗涤细胞3次，并用200 μL PBS重悬细胞。
• 6． 转移细胞至流式管进行流式细胞分析。

检测结果：

• 经FACS验证， Claudin18.2-VLP 蛋白（Cat. No. CL2-HF218）可与Claudin18.2-CAR-293细胞特异性结合，不与未转染Claudin18.2-CAR的PBMCs特异性结合。

用阴性对照蛋白（Cat. No. VLP-NF2P4）和Human Claudin18.2-VLP 蛋白（Cat. No. CL2-HF218）分别结合转染Claudin18.2-CAR-293细胞，结果表明，Claudin18.2-VLP 蛋白（Cat. No. CL2-HF218）可与Claudin18.2-CAR-293细胞特异性结合。

用阴性对照蛋白（Cat. No. VLP-NF2P4）和Human Claudin18.2-VLP 蛋白（Cat. No. CL2-HF218）分别与未转染Claudin18.2-CAR的PBMCs结合，结果表明，无非特异性结合信号。