火眼金睛的SEC-MALS：准确测定蛋白分子量，确认蛋白聚体状态

案例一：TNFSF三聚体蛋白
案例二：IL-2R 聚合物
案例三：CTLA-4同源二聚体

案例四：Spike蛋白三聚体

案例一：TNFSF三聚体蛋白

SEC-MALS验证蛋白结构和纯度

Cat.No. OXL-H52Q8(Human OX40 Ligand /TNFSF4 Protein, His Tag, active trimer)

Fig 6. 经MALS验证，人源 OX40 Ligand, His Tag, active trimer (Cat. No. OXL-H52Q8)的纯度超过 95%，分子量约为60-80kDa。

FACS验证蛋白细胞功能活性

Cat.No. OXL-H52Q8(Human OX40 Ligand /TNFSF4 Protein, His Tag, active trimer)

Fig 7. FACS 分析显示，人源 OX40 Ligand, His Tag (active trimer) (Cat. No. OXL-H52Q8)可以与过表达人源OX40的 293T细胞结合。所用 OX40 Ligand浓度为0.1 μg/mL。

Protocol

案例二：IL-2R 异源二聚/三聚体

Cat.No. ILG-H5254(Human IL-2RB&IL-2RG Heterodimer Protein, Fc Tag&Fc Tag)

Fig 8. 经MALS验证，人源 IL-2RB&IL-2RG 异源二聚体蛋白, Fc Tag&Fc Tag(Cat. No.ILG-H5254)的纯度超过90%，且蛋白的分子量在145-165 kDa左右。

Cat. No. ILG-H5257(Human IL-2RB&IL-2RA&IL-2RG, Fc Tag&Fc Tag)

Fig 9. 经MALS验证，人源 IL-2RB&IL-2RA&IL-2RG异源三聚体蛋白, Fc Tag&Fc Tag(Cat. No. ILG-H5257)的纯度超过90%，且该蛋白的分子量在175-190 kDa左右。

Fig 10. IL-2 与 ACRO 的 IL2R 构建体的结合亲和力经SPR验证。

案例三：CTLA-4同源共价二聚体

Fig 11. 经 SEC-MALS 验证，人源CTLA-4, His Tag (Cat. No. CT4-H52H9) 的纯度超过90%，且该蛋白的分子量约为 45-60 kDa。

SPR验证CTLA-4二聚体亲和力

Fig 12. 经SPR验证，CTLA-4二聚体亲和力比单体提高10倍以上

案例四：Spike蛋白三聚体

Cat. No. SPN-C52H9(SARS-CoV-2 S protein, His Tag, Super stable trimer (MALS & NS-EM verified))

Fig 13. 经还原条件SDS-PAGE验证，SARS-CoV-2 S 蛋白、His Tag、Super stable trimer (MALS & NS-EM verified) (Cat. No. SPN-C52H9)的纯度通过超过90%，经SEC-MALS验证分子量约为550-660 kDa。大小和外观与NS-EM验证与已发表文献中报道的 SARS-CoV-2 三聚体相似。

Fig 14. S-6P蛋白，S-2P蛋白与S蛋白检测康复病人血清样本的抗体滴度的对比分析。结果发现，S-6P的信噪比显著高于S蛋白，S-2P以及其它公司的S蛋白，说明S-6P更适合于进行血清样本的抗体滴度检测，能在注射疫苗后的早期从血清中检测出抗体滴度水平，有利于疫苗的免疫原性评价。

参考文献

• [1]Bender M F , Li Y , Ivleva V B , et al. Protein and glycan molecular weight determination of highly glycosylated HIV-1 envelope trimers by HPSEC-MALS[J]. Vaccine, 2021(7523).
• [2]Sriram B , Tania C R , Davis A M , et al. Ligand binding kinetics of IL-2 and IL-15 to heteromers formed by extracellular domains of the three IL-2 receptor subunits[J]. International Immunology(11):1839.