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常见问题解答

常见问题解答

1. 关于蛋白重构、 储存的问题。

1) 按照ACRO提供的随货说明书中推荐的重构信息进行蛋白重构, 如果暂时不使用蛋白,建议先以冻干粉形式储存。

2) 重构后进行分装, 保证每管分装量不低于 对应COA上推荐的最小分装量, 如果分装规格必须低于COA推荐的每管最小分装量,建议添加 0.1% (W/V) BSA或HSA 作为保护剂, 避光保存在-70℃,三个月内使用,要避免反复冻融。因为冻融过程中很多因素都会影响蛋白的稳定性和活性,比如温度变化(上升/下降)速率和均匀度、操作方式因素,最终可能影响实验结果。

3) 建议以重构浓度进行储存,如果使用浓度低于推荐的重构浓度,可在重构浓度的基础上进一步稀释使用;如果使用浓度高于推荐的重构浓度,建议客户先按 COA 进行重构,再进行浓缩到需求浓度使用。

2. 为什么蛋白保存温度是-80℃,但运输是常温?

建议保存温度在-80℃是出于长期保存的稳妥考虑。我们的蛋白都是冻干粉,经过严格的稳定性测试,在常温下稳定性很好,而且我们选用的快递都能次日达,遇到特殊物流情况也就 2-3 天时间,短时间内冻干粉蛋白不会出现稳定性问题。 如果对运输温度特别在意,我们提供付费的蓝冰或者干冰运输。但出于冻干粉的可靠稳定性和全球客户多年来的实际经验,建议还是不用加运费的方案。

3. 重构后的液体形态的蛋白是否可以在4度或室温下储存?

我们强烈建议不要在4度或室温下储存重构溶解后的液体形态的蛋白。如果在一段时间内需要多次使用蛋白,最好的方法是按照COA分装对应规格推荐的每管最小分装量,在-70℃或以下保存,并根据需要解冻进行使用。另外,需避免重构蛋白反复冻融,一般冻融一次没有什么问题的。

4. 冻干粉蛋白的重构浓度高于 COA 建议浓度重构可以吗?

不推荐高于 COA 浓度的溶解,因为可能会影响到蛋白的稳定性或者定量。蛋白重构的浓度和溶剂需要按 COA 操作, 如果确实有特殊的重构需求,请与公司技术部门沟通,或者建议购买小包装进行预实验。

5. Buffer 中的保护剂、稳定剂是什么?

常见的有冻干保护剂海藻糖,稳定剂如 BSA 和 HSA 之类(避免蛋白吸附损失)。蛋白产品以冻干状态提供,冻干前的原液含有 10%海藻糖作为保护剂,重构后的海藻糖浓度因产品和批次而异,所有相关信息都将在特定批次的 COA 中提供给您。

6. ACRO 能否提供不加添加剂的蛋白?

海藻糖对于保持蛋白稳定性和活性至关重要,我们不推荐去掉。如果需要无海藻糖的蛋白,建议在试验前做一下缓冲液交换来去除海藻糖,市面上有许多可用的试剂盒,例如 Vivaspin 超滤系统。但请注意,换液过程中蛋白活性有可能会受到影响。

7. ACRO的产品效期如何计算?

产品的效期是从您收到货之日起并结合对应COA上的推荐储存时间进行计算,在此期间,您使用中遇到任何问题,都可以随时联系我们。

8. ACRO的冻干粉蛋白都是无菌的吗?

是的,冻干粉蛋白通常是将冻干前的原液用0.2μm过滤系统进行过滤后冻干的,所以它们是无菌的。

9. 怎样计算指定COA冻干批次的冻干前原液的浓度?

对应批次COA在Formulation部分包含冻干前原液的体积信息,可以直接根据对应规格质量和原液体积计算冻干前原液浓度: 原液浓度= Size(ug/mg)/(µl)

10. 带有 Fc tag是否为二聚体?

是的,所有的 Fc 融合蛋白在溶液中理论上会经历 Fc 介导的二聚化,其聚体形式可能会增强蛋白活性和稳定性。但某些Fc 融合蛋白有可能由于本身性质原因进一步聚集并形成高聚体。某些蛋白的非还原 SDS-PAGE 或 SEC数据能够反映获得的蛋白聚集形式(二聚体/三聚体/高聚体)。

11. 产品原液内毒素水平能不能代表冻干品的内毒素水平?

原液的内毒素水平可以代表冻干品的内毒素水平,根据经验,冻干品的内毒素检测值会比原液高20-30%(属于正常差异范围,因为冻干时需考虑适量补偿因吸附等损失及纯度因素),我们冻干过程是严格无菌无热源操作,一般不会引入热源,所以原液的内毒素水平基本上可以代表冻干品的内毒素水平。

12. ACRO的蛋白中是否有载体蛋白?

ACRO 的绝大部分产品都未添加载体蛋白,只有少数几个产品添加了 BSA,建议以产品网站 buffer 信息为准。

13. 生物素标记后的蛋白对其活性会有影响吗?

大多数来自 ACRO 的生物素化蛋白是基于 avi-tag 标记的单点酶标的方法进行生物素化的。 理论上,添加任何分子/标签都可能影响蛋白质的天然状态,从而影响其生物活性。然而,生物素分子和 Avi 标记都很小,并且插入到目标蛋白的结构域之外。因此,一般情况下蛋白活性不太可能受到标记的影响, ACRO 一般会对所有标记蛋白进行生物活性验证以确保蛋白活性良好,验证方法是通过 ELISA、 FACS 或细胞法检测生物素蛋白与抗体或配体的结合。

14. 如何保证生物素标记的均一性和重复性?

我们有丰富的生物素标记经验,对于生物素标记的方法和条件都有足够的积累,形成了标准化生产流程。 另外, 我们也会严格控制出厂产品的 HABA 值以及活性方法验证的批间差。相对而言,在这个严格的标准下,生物素标记产品的产量会受影响,这也是它相对未标记产品更贵的一个原因。

15. 生物素化的产品中是否有游离的生物素?

酶标和化标两种生物素化的产品都会通过脱盐去除掉游离的生物素,即使有残留,也只是有很少的残留。

16. 如何计算蛋白产品的比活(比活是 cell based assay 才有的)?

1)可以将 Cell based assay 实验中得到得 ED50 输入到下面链接中进行换算。

https://www.biomol.com/resources/tools/cytokine-activity-conversion/

2)可以带入下面公式进行计算:

17. 海藻糖在细胞实验中是否会对细胞产生影响?

ACRO 使用的海藻糖是药用注射级的,而且在实验的时候还会进行稀释,这种情况下海藻糖对细胞实验理论上影响不大,如果是严谨起见,可以实验设置buffer对照组。

18. 对于设计一般的受体配体结合实验,关于蛋白选择ACRO有什么建议?

如果类似PD1和PDL1这样的免疫检查点,受体配体的亲和力比较弱的蛋白,建议选择蛋白本身带有Fc或者mFc标签的蛋白,检测受体和配体的结合,这样得到的信号会比较好,实验也会更稳定,具体实验也欢迎参考ACRO网页实验数据或者和ACRO技术支持进一步沟通。

19. 为什么你们家大部分的蛋白是HEK293表达?

HEK293细胞,又叫人胚胎肾细胞293. HEK293表达的蛋白,它的折叠修饰更加接近人体内真实的蛋白的形式。HEK293表达的蛋白,它的折叠修饰更加接近人体内真实的蛋白的形式,而我们开发的大部分都是人类相关疾病的靶点或者因子,所以选择了HEK293表达系统。

如果您有更多问题,可发送邮件至 techsupport@acrobiosystems.com 咨询,我们将尽快为您解答,谢谢!

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