T细胞重定向双特异性抗体已经成为一类新的治疗药物,旨在同时通过CD3结合T细胞,并通过肿瘤细胞特异性抗原(tumor‑cell‑specific antigens,TSA)结合肿瘤细胞,诱导T细胞介导的肿瘤细胞杀伤。TSAxCD3双抗的效力和安全性取决于多种因素。例如,肿瘤抗原靶向臂的价态和/或亲和性可以影响其对肿瘤细胞的选择性。类似地,与 CD3结合的亲和力增强T细胞激活水平,这也影响着双抗的效力和潜在毒性。
研究团队开发了一系列与CD3亲和力不同的双抗,与Jurkat、Human T细胞、Cyno T细胞进行亲和力结合检测验证,中等结合CD3M、弱结合CD3W、非常弱结合CD3VW与T细胞结合依次减弱,CD3M、CD3W主要依赖于单价结合, CD3VW因为亲和力太弱SPR无法检测,依赖于双价结合。对靶抗原的分析显示,不同亲和力CD3双抗对同一靶抗原具有相同亲和力,且无脱靶结合。
CD3亲和性驱动CD3双抗的溶酶体/晚期核内体积累水平。肽接头裂解的程度与CD3臂的亲和性相关,CD3的亲和性越高,则越容易向晚期的核内体/溶酶体间室转移。因为不管结合哪个靶抗原,在CD3M组观察到高水平肽接头裂解,说明CD3双抗一结合细胞,就会内化被运输到含组织蛋白酶B的细胞内,CD3的亲和性越强,内化程度越高。
CD3双抗的肿瘤细胞的结合能力和的效力之间的相关性依赖于CD3的亲和性。利用不同靶抗原构建的CD3双抗进行体外T细胞激活实验,结果显示CD3亲和力较高的双抗具有较高的T细胞激活信号,EC50值较低。
采用靶抗原阻断抗体对CD3亲和力和其杀伤能力关系进行研究,通过加入同样的癌细胞、PBMCs以及等量的不同亲和力的CD3双抗,加入过高的阻断抗体,不同亲和力的CD3双抗,其肿瘤细胞杀伤效应差别不明显;当阻断抗体浓度降低时,CD3M组双抗的杀伤能力较强,说明在降低抗原结合的情况下,拥有较高CD3亲和力的CD3双抗保持较高的细胞毒性杀伤能力。
CD3双抗的生物分布同样受其与CD3的亲和性驱动。体内分布研究显示,CD3M组双抗主要分布与脾脏和肿瘤区域,CD3W组双抗主要分布在肿瘤区域,通过加入抗原阻断抗体和CD3阻断抗体,结果同样说明拥有较低亲和力的CD3双抗主要分布肿瘤区域。
在异源肿瘤模型中,CD3较弱的双抗可有效地减少肿瘤负荷,同时触发较低水平的细胞因子(IFN-γ、IL-2)。CD20/BCMA×CD3W双抗与CD3M双抗具有相似的肿瘤细胞清除能力,但是相对于CD3M双抗,CD20/BCMA×CD3W双抗诱导较少的细胞因子分泌。
与中等亲和力CD3双抗相比,弱亲和力CD3双抗的相对暴露更高,半衰期更长,细胞因子释放水平更低,表明其与CD3的亲和力较低,导致更有利的动力学。
小结
在保持对肿瘤抗原结合臂的亲和力恒定的情况下,对于CD3抗原的结合亲和力不同的T细胞重定向双抗,可产生相似的体内抗肿瘤能力,但具有不同生物分布、T细胞诱导的细胞因子释放和PK特性,可以指导未来双抗药物的设计。 因此,此研究针对CD3双抗与CD3的结合亲和性的分析,揭示其对于CD3双抗的意义,是CD3双抗“design for purpose”旅程的重要探索。
ACROBiosystems
ACROBiosystems为助力双特异性抗体开发,提供优势卓越的高质量CD3系列蛋白、双抗热门靶点蛋白、IgG样双抗同型对照IgG Fc系列蛋白。
高质量CD3系列蛋白
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CD3全系列靶点蛋白:CD3E(CD3ε)、CD3D (CD3δ)、CD3G(CD3γ)、CD3E&CD3D (CD3ε& CD3δ)、CD3E&CD3G (CD3ε& CD3γ)
His,His&Avi,Fc,Llama Fc,Flag等多标签设计
Human、Mouse、Rat、Rabbit、Cynomolgus等多种属选择
2
结构均一
CD3E&CD3D、 CD3E&CD3G,经非还原电泳和MALS技术严格确认为1:1异源二聚体。如:CD3E&CD3D(Cat. No. CDD-H52Wa)的验证结果。
经还原和非还原条件SDS-PAGE验证,人源CD3E&CD3D异源二聚体蛋白 (Cat. No. CDD-H52Wa) 纯度高于 95%;经SEC-MALS 验证,Human CD3E&CD3D异源二聚体蛋白 (Cat. No. CDD-H52Wa) 纯度高于 85%,分子量为80-90 kDa。
3
批间一致性更高
经ELISA验证在各种应用场景中表现出高活性,并采用多种分析技术进行全面严格质控。如:不同批次的CD3E&CD3D(Cat. No. CDD-H82W6) ELISA验证结果。
经ELISA验证,生物素化人源CD3E&CD3D异源二聚体蛋白,His, Avitag&Tag Free (Cat. No. CDD-H82W6) 可以与单克隆抗体Mouse IgG2a (Clone: OKT3) (Cat. No. CDE-M120a) 特异性结合,线性区间为0.2-6 ng/mL, 批间差EC50<0.0001 μg/mL。
4
更高活性,符合药物开发要求
经与OKT3、SP34-2、UCHT1等热门抗体的结合验证完全符合药物开发要求,可加速抗体药物的开发进程。如:CD3E&CD3D (Cat. No. CDD-H5255) ELISA验证结果。
经ELISA验证,Human CD3 epsilon & CD3 delta Heterodimer Protein, His Tag&Tag Free (MALS verified) (Cat. No. CDD-H52W1) 可与anti-BCMA×CD3 scFv- IgG1 Fc Tag特异性结合,线性区间为0.08-3 ng/mL, 与同型对照Human IgG1 Fc Protein, Tag Free (MALS verified)(Cat. No. FCC-H5214) 不结合。
5
更多应用场景覆盖:
可应用于抗体免疫滴度检测,抗体筛选,亲和力测定,抗体质控和临床血药浓度分析等。如:CD3E&CD3D(Cat. No. CDD-H52W1)SPR验证结果。
经SPR验证,BCMA×CD3 双特异性抗体可以与CD3E&CD3D(Cat. No. CDD-H52W1)异源二聚体特异性结合,亲和力常数为31.8 nM,可应用于亲和力测定和抗体药物鉴定。
分子 | 货号 | 种属 | 产品描述 | 订购/预购 |
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CD3E & CD3D | CDD-H5255 | Human | Human CD3 epsilon&CD3 delta Heterodimer Protein, Fc Tag&Fc Tag (MALS verified) | |
CD3E & CD3D | CDD-H52Wa | Human | Human CD3 epsilon&CD3 delta Heterodimer Protein, Fc,His Tag&Fc,Flag Tag (MALS verified) | |
CD3E & CD3D | CDD-H82W6 | Human | Biotinylated Human CD3 epsilon&CD3 delta Heterodimer Protein, His,Avitag™&Tag Free (MALS verified) | |
CD3E & CD3D | CDD-H52W1 | Human | Human CD3 epsilon & CD3 delta Heterodimer Protein, His Tag&Tag Free (MALS verified) | |
CD3E & CD3G | CDG-H5253 | Human | Human CD3 epsilon&CD3 gamma Heterodimer Protein, Fc Tag&Fc Tag (MALS verified) | |
CD3E & CD3G | CDG-H52W9 | Human | Human CD3 epsilon&CD3 gamma Heterodimer Protein, Fc,His Tag&Fc,Flag Tag (MALS verified) | |
CD3 epsilon | CDE-H5223 | Human | Human CD3 epsilon Protein, His Tag (MALS verified) | |
CD3 epsilon | CDE-H5256 | Human | Human CD3 epsilon Protein, Fc,His Tag | |
CD3 epsilon | CDE-C5226 | Cynomolgus | Cynomolgus CD3 epsilon Protein, His Tag (MALS verified) |
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