【新品速递】Alexa Fluor系列荧光标记蛋白强势来袭！

Alexa Fluor 染料是罗丹明或香豆素等染料的衍生物，磺酸酯基团的引入使得Alexa染料呈负电性和亲水性，具有更好的光学稳定性、发光强度以及pH的适应性，可应用于生物研究中对组织、细胞和生物分子的标记和定位等。Alexa Fluor系列染料激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域，根据激发光最大波长(nm)的不同，Alexa Fluor被命名为不同的染料类型，具体如下表所示。

① 水溶性好：通过亲水性磺酸基的引入，提高荧光染料的水溶性，且储存不易产生沉淀。

② 发射光谱窄：相较于传统有机荧光染料，Alexa Fluor染料具有较窄的发射光谱，从而降低多荧光检测的交叉串色。

③ 抗淬灭、荧光强度强：光稳定性好，相关研究显示，将Alexa Fluor和AMCA、 Lucifer Yellow、荧光素、罗丹明6G和Cy3 等荧光标记蛋白的信号强度对比分析发现，尽管这些染料具有与Alexa Fluor染料类似的发射和激发光谱，但在各染料的吸收和发射光谱范围内Alexa Fluor染料量子产率更高、荧光强度更强、光稳定性更好，尤其适用荧光成像的应用场景。

④ 非pH敏感：Panchuk ­Voloshina团队对Alexa Fluor染料的发射光谱、吸收光谱和荧光信号强度进行研究时，证明Alexa Fluor染料对pH的变化不敏感，可在 pH为4-10下保持稳定结构和强荧光信号。

由于Alexa Fluor染料的特色优势，可将其标记靶点蛋白后用于细胞治疗药物开发的多个场景，如使用Alexa Fluor标记蛋白流式检测CAR-T细胞阳性率、PK 研究，通过IHC技术在组织水平下检测CAR-T药物的浸润分布情况等，是细胞治疗药物开发过程中不可或缺的重要试剂，高质量的Alexa Fluor标记蛋白对CAR-T细胞治疗药物的产品质量至关重要。在常规工艺下，可利用常规的琥珀酰酯( NHS) 化学反应，将Alexa Fluor 染料与蛋白质的氨基基团( —NH2，包括赖氨酸侧链氨基和蛋白末端氨基) 连接，共价结合形成一个稳定的琥珀酰亚胺酯结构，来完成蛋白质的Alexa Fluor 标记，但由于不同蛋白质氨基酸序列长度及蛋白质表面赖氨酸数目的差异，同样的荧光标记工艺对不同靶点蛋白的活性影响程度，及相同蛋白质的不同生产批次的影响程度也有着较大的差异。因此，采用定点技术将染料对蛋白进行标记，是开发高质量Alexa Fluor荧光标记蛋白的关键。

为满足细胞治疗产品质控和临床样本分析更高质量标准的检测要求，填补蛋白质定点荧光标记产品的市场空白，ACROBiosystems搭建了“星级标准”的Star Staining新一代荧光定点标记技术平台，与传统非定点蛋白质标记相比，Star Staining定点标记技术可最大程度的维持蛋白的天然构象和活性，并保证标记产品性能的高度均一性和批间一致性。依托Star Staining定点标记技术平台，ACROBiosystems开发了一系列独具特色的Alexa Fluor系列荧光定点标记蛋白产品，包括Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 647等多种荧光类型，覆盖CD19，BCMA，MSLN，GPC3，CD22等热门CAR-T靶点蛋白，助力细胞治疗药物的研发进程。

5e5 of anti-CD19 CAR-293 cells were stained with 100 μL of 10 μg/mL of AF555-Labeled Human CD19 (20-291), His Tag (Cat. No. CD9-HA2H7), and negative control protein respectively (Fig. C and B), and non-transfected 293 cells were used as a control (Fig. A). AF555 signal was used to evaluate the binding activity (QC tested).

Protocol

5e5 of PBMCs were stained with AF555-Labeled Human CD19 (20-291), His Tag (Cat. No. CD9-HA2H7) and anti-CD3 antibody, washed and then analyzed with FACS. FITC signal was used to evaluate the expression of CD3+ T cells in PBMCs, and AF555 signal was used to evaluate the non-specific binding activity to PBMCs (QC tested).

Protocol

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参考文献

1. Yonghong Li, Yan Huo, Lei Yu, Junzhi Wang, Quality Control and Nonclinical Research on CAR-T Cell Products: General Principles and Key Issues.https://doi.org/10.1016/j.eng.2018.12.003.

2. 王洪苏, 关桂静, 刘金香. Alexa Fluor荧光标记在细胞学和分子生物学研究中的应用[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(9):71-71.

3. Panchuk-Voloshina N, Haugland RP, Bishop-Stewart J, et al. Alexa dyes, a series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates. J Histochem Cytochem. 1999;47(9):1179-1188. doi:10.1177/002215549904700910

4. Dean KM, Palmer AE. Advances in fluorescence labeling strategies for dynamic cellular imaging. Nat Chem Biol. 2014;10(7):512-523. doi:10.1038/nchembio.1556