2022年11月10日，英百瑞IBR854细胞注射液临床试验申请获得国家药监局受理，为国内首个针对实体肿瘤的非基因修饰方法的CAR-raNK细胞疗法，IBR854注射液是同源异体外周血来源的通用现货型CAR-raNK细胞产品，适应症为实体肿瘤。
NK细胞是机体的第一道防线，具有抗体依赖的细胞毒性(ADCC)作用以及可以产生大量细胞因子、趋化因子以及生长因子，能自发杀伤肿瘤细胞和病原体，并参与机体的抗肿瘤免疫监视和免疫应答。相比于其他免疫细胞，CAR-NK细胞疗法在癌症免疫治疗中的优势包括快速有效的反应，不会引发移植物抗宿主病，轻微甚至没有细胞因子释放综合征，并且没有神经毒性、来源广泛以及可大规模衍生等，因此，CAR-NK细胞疗法越来越受到行业的广泛关注。
自体CAR-NK细胞的疗法基本流程
Blood Adv. 2020;4(22):5868-5876.
NK细胞的来源非常广泛，如外周血、脐带血、NK细胞系、胚胎干细胞、人类诱导多能干细胞等多种方式。
1）外周血淋巴细胞来源（PB-NK）：在外周血中，NK细胞占白细胞的5-20%，且广泛表达一些活性受体，因此具有作为CAR-NK细胞来源的潜力。目前，自体和异体来源的CAR-PB-NK淋巴细胞在急性白血病治疗方面取得了不错的临床效果，但对实体瘤的疗效相对较低。
2）NK 细胞系来源：考虑到原代NK细胞的分离、纯化和扩增的困难，以及转导CAR效率低下等问题，临床中已有使用具有无限扩增能力的成熟NK细胞系，研究表明，NK-92细胞产生的穿孔素、颗粒酶和一系列具有杀伤作用的细胞因子水平高于PB-NK，具有IL-2依赖性的NK-92细胞系在体外易于扩增、培养和活化的优势，以及输注后对白血病细胞显示出持续、可靠的细胞毒性。值得注意的是，NK-92细胞来源于非霍奇金淋巴瘤患者，因此在输注前需要进行照射，以消除恶性转化和染色体异常等风险。
3）干细胞来源：近年来，干细胞如胚胎干细胞（ESC）和诱导多能干细胞（iPSC）衍生的NK细胞也引起了广泛关注。iPSC衍生的NK细胞具有PB-NK细胞和NK-92细胞的优点，且与PB-NK细胞相比可低水平表达细胞杀伤免疫球蛋白样受体。目前，已经建立了可在短时间内大规模诱导和扩增NK样细胞的标准化方法。
NK细胞来源示意图，Biomark Res. 2022;10(1):12.
CAR-NK疗法的研究目前处于起步阶段，临床项目的数量逐年增加，在研究的靶标方面，CD19靶点在血液肿瘤研究中较多，在实体瘤中主要聚焦在肿瘤相关抗原HER2、MUC1和PMSA等靶点。
部分CAR-NK细胞临床项目
Immunotherapy. 2020;12(9):653-664.
在血液瘤方面，以CD19为靶点的CAR-NK疗法研究项目最为常见，有研究人员开发了脐带血来源的同种异体CD19-NK细胞，在表达CD19 CAR的同时共表达IL-15，临床试验显示，没有观察到明显的细胞因子释放综合征（CRS）、GVHD以及神经毒性；另外，也有正在进行中的CD33 CAR-NK疗法临床项目，相比CD33 CAR-T疗法，靶向CD33的 CAR-NK细胞的首次人体临床试验报告结果表明，在三名复发/难治性AML患者中表现出更好的安全性和耐受性。此外，针对血液恶性肿瘤，在临床前和临床管线中还有其他多种针对各种TAA的CAR-NK疗法，包括但不限于用于难治性B细胞淋巴瘤（CD22-CAR-NK、CD22/CD19-CAR-NK）、弥漫性大B细胞淋巴瘤，T细胞淋巴瘤（CD7-CAR-NK）和复发/难治性多发性骨髓瘤（BCMA-CAR-NK）等。
研究显示，CAR细胞治疗对实体瘤缺乏疗效，主要原因可能是CAR细胞肿瘤浸润不佳、肿瘤相关抗原异质性和免疫抑制肿瘤微环境（TME）等所致。基于CAR-NK疗法的本身优势，多项研究在实体瘤临床治疗中疗效凸显，涉及靶点主要有HER2、MUC1、PD-L1、PSMA，MSLN等。
1）HER2:尽管HER2 CAR-T疗法在胶质母细胞瘤中已有明显疗效，但肿瘤微环境中高效应功能T细胞的产生可快速导致抗原丢失而引起疾病复发。通过颅内注射将靶向HER2的CAR-NK细胞输送到腔壁中，表现出良好的NK细胞杀伤作用，且细胞毒性维持在基线水平，降低抗原丢失风险。
2）MUC1:NK-92细胞表达的具有CD28和CD137信号结构域的MUC1-CAR（MUC1-CAR-NK-92），可在体外有效裂解MUC1靶细胞；13名PD-L1和MUC1阳性癌症患者（包括但不限于肺癌、胰腺癌、卵巢癌和结肠癌）接受MUC1-CAR-NK-92细胞输注后，无患者出现细胞因子风暴或骨髓抑制的现象，表明该疗法的安全性。
3）PSMA，MSLN，NKG2D ligand:目前，也有正在进行的针对PSMA，MSLN，NKG2D ligand等靶点的CAR-NK临床项目，主要治疗疾病有前列腺癌、卵巢癌以及转移性实体瘤等，初期临床已显示出良好的安全性。
CAR-NK细胞的构建，Biomark Res. 2022;10(1):12.
NK细胞在抗肿瘤方面起着重要作用，临床前及临床研究结果均揭示了CAR-NK细胞具备较好的杀伤血液瘤和实体瘤细胞的功能，相比于CAR-T细胞，两者CAR结构相似，但CAR-NK细胞具有更强的肿瘤杀伤毒性，且不易引起 GVHD、CRS 等不良反应，随着NK细胞生物学和转化研究领域的不断进展，期待CAR-NK细胞疗法在肿瘤免疫治疗不断有新的突破。
ACROBiosystems百普赛斯致力于支持CAR细胞疗法的相关研究，开发了一系列高质量CAR靶点蛋白，包括CD19、BCMA、MSLN、HER2、CD33等，覆盖多种属和不同荧光标记类型，可用于免疫筛选、CAR表达质控以及临床PK研究。此外，我们还提供全面的高活性细胞因子，具有无菌、低内毒素、Carrier Free等特性，适合T/NK细胞培养、iPSC诱导分化等应用场景，加速您的药物研发进程。
参考文献
1. Basar R, Daher M, Rezvani K. Next-generation cell therapies: the emerging role of CAR-NK cells. Blood Adv. 2020;4(22):5868-5876. doi:10.1182/bloodadvances.2020002547
2. Zhang, Leisheng et al. “CAR-NK cells for cancer immunotherapy: from bench to bedside.” Biomarker research vol. 10,1 12. 18 Mar. 2022, doi:10.1186/s40364-022-00364-6
3. Franks SE, Wolfson B, Hodge JW. Natural Born Killers: NK Cells in Cancer Therapy. Cancers (Basel). 2020 Jul 31;12(8):2131. doi: 10.3390/cancers12082131. PMID: 32751977; PMCID: PMC7465121.
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