抗体药物偶联物 (ADC) 兼具高度靶向性和高细胞毒性，被称为“魔术子弹”。目前市场上有几种 FDA 批准的 ADC，还有更多正在开发中。然而，ADC 由于其结构的多样性和复杂性，需要对生产的 ADC 进行深入的分析表征以及体内药理学研究以确保药物安全。
表征生物药物是整个药物从开发到临床评估过程的关键步骤。ADC的骨架是抗体，所以ADC的药代动力学与未偶联的单克隆抗体有许多相似的地方，例如半衰期长、清除率低等。然而，偶联小分子药物导致ADC异质性增加。因此，必须评估多种分析物以揭示ADC 的PK特征，过程更加复杂。一些表征方法是 ADC 所独有的。
药代动力学 (PK) 和药效学 (PD) 研究对于影响临床试验的给药决策、给药方案和最大耐受剂量至关重要。同样，FDA 要求进行 PK/PD 研究以获得监管批准。这些研究旨在帮助研究人员了解药物暴露情况、评估其功效并确定毒性。由于 ADC 的复杂性及其对不同细胞毒性有效载荷释放方法的依赖，了解抗体和细胞毒性有效载荷的药代动力学至关重要。
ADC 药物抗体比 (DAR) 的量化是 ADC 分析的一个重要方面，DAR 是指与 ADC 中每个抗体分子偶联的药物分子数。它可以深入了解 ADC 的同质性和效力。1）最佳 DAR 会因特定的药物和抗体组合而异，并且 DAR 会影响 ADC 的疗效和安全性。例如，高 DAR 可以增加 ADC 的效力，但也可能导致毒性增加。2）DAR 会影响 ADC 的药代动力学 (PK)，包括其清除率和在体内的分布。了解 ADC 的 PK 曲线对于优化给药方案和确保 ADC 以适当的浓度达到其目标至关重要。3）DAR 分析对于 ADC 制造过程中的质量控制非常重要。DAR 可能因结合方法和其他制造参数而异，确保一致性和可重复性对于生产安全有效的产品非常重要。
总之，DAR 是理解生成的 PK 曲线的关键因素，并且对于优化 ADC 的功效和安全性很重要。此外，DAR 的一致性可用于帮助确保制造过程中的质量控制。
影响 ADC 质量的一个重要属性是 DAR 和载药量分布。这主要是由于生物转化和清除率不同导致其随时间发生变化，所以需要进行全面的体内评估。常用于确认DAR值的方法包括测量结合型抗体(至少偶联一个小分子毒素的抗体) 、总抗体(偶联和未偶联小分子毒素的抗体) 、结合型效应分子、游离小分子毒素及其类似物。因此，金标准分为两种方法：基于免疫测定的方法和液相色谱-质谱法 (LC-MS)。
ADC 分子类型和典型的评估分析方法
配体结合测定 (LBA)，如酶联免疫吸附测定 (ELISA)，是一种高度灵敏和特异性的技术，可以对 ADC 的抗体成分进行定量。在该方法中，使用特异性抗体捕获和检测单克隆抗体 (mAb)。通常使用夹心测定形式，对 ADC 的抗体或有效负载部分使用物种特异性捕获和检测试剂。总抗体(DAR 0–8)和偶联抗体(DAR 1–8)通常使用酶联免疫吸附测定法 (ELISA) 测定。在进行 PK 研究时，ELISA 也是 mAb 部分的金标准，因为它在测定形式上具有灵活性。
用于分析血清中 ADC 的不同 LBA方法
液相色谱-质谱 (LC-MS) 是一种高度灵敏和特异性的技术，可以对 ADC 进行更深入的结构分析，是对 ELISA 和其他 LBA 技术的补充。该方法通常用于分析小分子来评估有效载荷递送、浓度和通过其代谢物释放的药物量。与更容易直接检测样品的 ELISA 不同，LC-MS 方法需要初始纯化步骤来进行 DAR 和 PK 分析：通常是使用免疫亲和柱或通过固/液相萃取和一般蛋白质沉淀法的免疫亲和纯化步骤。此外，用于 PK 研究的药物浓度需要使用内标：更常见的是将细胞毒性有效负载的氘化标准“掺入”溶液中，以将浓度与所得信号强度相关联。之后，生成的溶液可以通过 LC-MS 运行。抗体偶联药物的所得光谱需要用于反卷积和 DAR 分析的软件。然而，游离、未结合药物的 LC-MS 评估可以通过 MS/MS 分析进行评估，提供体内 ADC 功效的补充表征。
（左）ADC 的色谱图 （中）隔离式 ADC 的原始频谱
（右）解卷积光谱显示血清中的 DAR 值分布
ADC 是一种用于分析的复杂生物分子，其每个组分都有不同的表征方法。随着基质复杂性和物种的增加，需要对每个组分的 DAR 和 PK/PD 研究进行全面评估，如使用 ELISA 和 LC-MS 等分析方法。ELISA 简单、灵活且易于操作。然而，LC-MS 是基质和物种独立的，不需要专门的试剂，可用于确定生物样品中的 DAR 值。
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货号
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产品描述
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MME-M5252
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Mouse Anti-MMAE Antibody, Mouse IgG1 (MALS verified)
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MME-PLS104
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HRP conjugated Anti-MMAE Antibody, mAb
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Immobilized Disitamab Vedotin at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind HRP conjugated Anti-MMAE Antibody, mAb (Cat. No. MME-PLS104) with a linear range of 0.5-16 ng/mL (QC tested).
Immobilized Disitamab Vedotin (RC48) at 0.2 μg/mL (100 μL/well) can bind Mouse Anti-MMAE Antibody, Mouse IgG1 (Cat. No. MME-M5252) with a linear range of 0.1-2 ng/mL (QC tested).
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参考文献
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