【最强组合】肺癌治疗热门靶点——DLL3 & Notch

 Delta样配体-3（δ-like ligand 3）是一种单程 I 型跨膜蛋白，属于抑制性Notch通路配体家族成员之一，Notch信号通路是一种高度保守的细胞间信号通路，参与多种发育过程，包括肺神经内分泌细胞的发育^1-2，而DLL3在Notch信号传导中发挥关键作用。

研究表明，DLL3在小细胞肺癌（SCLC）和其他神经内分泌肿瘤中高度表达，而在正常人体内低表达，这种具有限制性的高表达和表达范围引起了研究者探索DLL3作为SCLC和其他癌症新型治疗靶点的极大兴趣。

DLL3为一种附着在细胞表面的单次跨膜蛋白，人DLL3基因定位于染色体19q13，其开放阅读框长度约为1800 bp。完整结构包含1个DSL结构域、1个胞内结构域和6个表皮生长因子样结构域³。近年来，越来越多的研究显示，DLL3可与不同的Notch受体结合，参与到复杂的肿瘤调控过程中，既可表现出促癌作用，也可表现出抑癌作用。

 图1 DLL3结构示意图

*The figure was derived from Frontiers in Immunology publication⁴

配体DLL3通过与Notch受体结合，可直接或间接地发挥生物学功能作用。Notch受体有4种（Notch 1-4），DLL3可与不同Notch受体结合影响不同肿瘤的调控与进展。Notch蛋白为一类保守的单次跨膜蛋白，受体分子量约为300 kDa⁵。如图2所示，Notch受体含胞外区、跨膜区和胞内区3部分。

图2. Notch1-4结构

*The figure was derived from Frontiers in Immunology publication⁴

不同于Notch其它配体，目前研究表明DLL3是一种抑制性Notch配体。配体DLL3和Notch受体结合，在SCLC中具有Notch通路的抑制作用：

> 在SCLC中，促进DLL3表达，DLL3与Notch1受体结合，将抑制Notch信号活化，Notch信号靶基因HES1、HEY1的表达下调，对肿瘤的抑制解除，促进SCLC的发生发展； 

> DLL3/Notch2可以增加细胞周期蛋白CyclinD1和CyclinD3的表达，提示DLL3/Notch2可能通过上调CyclinD1和CyclinD3蛋白促进SCLC细胞的增殖；

> 此外DLL3和Notch受体结合还与其它肿瘤密切相关，比如，DLL3/Notch2参与垂体腺瘤的增殖和侵袭的调节；

> DLL3/Notch2/Notch4对黑色素瘤细胞生存和生长至关重要；

> DLL3/Notch2/Notch3介导了卵巢癌细胞的增殖和分化，并且与较差的生存期相关。

总的来说，DLL3可与不同的Notch受体结合，在细胞增殖、分化及凋亡中发挥着多种功能。

根据肿瘤类型和细胞生长环境不同，DLL3激活可发挥促癌或抑癌的双向作用。研究显示，DLL3在小细胞肺癌、乳腺癌、垂体瘤 、急性髓系白血病中有促癌作用，但在肝癌、神经胶质瘤和恶性胶质瘤中却发挥了抑癌作用。

DLL3作为SCLC和其他肿瘤的重要靶点，围绕DLL3开发的多种疗法近年来发展迅速。以双特异性抗体、单克隆抗体、抗体偶联药物(ADC)、细胞治疗、双特异性T细胞接合剂(BiTE)等类型的DLL3药物在临床中有进展且部分治疗效果在临床实验中已经得到了验证。

DLL3药物临床信息

双特异性T细胞接合剂是一种新型免疫疗法，可重新定向患者T细胞以杀死肿瘤细胞⁶。AMG 757是半衰期延长的BiTE分子。这些发现表明AMG 757可用作SCLC的DLL3靶向免疫治疗剂。一项针对SCLC患者的AMG 757的I期研究正在进行中(NCT03319940)。

AMG 119是一种过继性细胞疗法，患者T细胞修饰靶向DLL3并攻击DLL3阳性细胞⁷。体外DLL3的SCLC细胞减少，体内SCLC异种移植模型中的肿瘤生长。一项评估AMG 119治疗 SCLC的安全性、耐受性和有效性的I期研究 (NCT03392064) 也在进行中。

 图3. DLL3在恶性肿瘤中的表达和治疗潜力

DLL3及Notch蛋白由高质量的人源细胞（HEK293细胞）表达

DLL3蛋白产品及其Notch受体

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Notch受体蛋白

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高生物活性 —— ELISA，FACS，SPR，BLI

✍ 活性 (Bioactivity) -DLL3：ELISA

Immobilized Biotinylated Human DLL3, His,Avitag (Cat. No. DL3-H82E4) at 1 μg/mL (100 μL/well) on streptavidin (Cat. No. STN-N5116) precoated (0.5 μg/well) plate can bind Anti-DLL3 Antibody (specific Binding EGFs of DLL3), Human IgG1 with a linear range of 0.1-4 ng/mL (QC tested).

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✍ 活性 (Bioactivity) -DLL3：FACS

5e5 of anti-DLL3 CAR-293 cells were stained with 100 μL of 1:25 dilution (4 μL stock solution in 100 μL FACS buffer) of PE-Labeled Human DLL3 Protein, His Tag (Cat. No. DL3-HP2H7) and negative control protein respectively. PE signal was used to evaluate the binding activity (QC tested).

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✍ 活性 (Bioactivity) -Notch：SPR

Human Jagged 1, His Tag (Cat. No. JA1-H52H9) immobilized on CM5 Chip can bind Human NOTCH1, Fc Tag (Cat. No. NO1-H5255) with an affinity constant of 5.13 μM as determined in a SPR assay (Biacore T200) (Routinely tested).

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✍ 活性 (Bioactivity) -Notch：BLI

Loaded Human NOTCH2, Fc Tag (Cat. No. NO2-H5255) on Protein A Biosensor, can bind Human DLL4, His Tag (Cat. No. DL4-H5227) with an affinity constant of 77.6 nM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e) (Routinely tested).

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高纯度 —— SDS-PAGE, SEC-MALS

The purity of Human DLL3, His Tag (Cat. No. DL3-H52H4) is greater than 95% verified by SDS-PAGE and more than 95% verified by SEC-MALS.

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参考资料：

1. Morimoto M, Nishinakamura R, Saga Y, Kopan R. Different assemblies of notch receptors coordinate the distribution of the major bronchial Clara, ciliated and neuroendocrine cells. Development. 2012;139(23):4365–73.

2. Bray SJ. Notch signalling in context. Nat Rev Mol Cell Biol. 2016;17(11):722–35.

3. Steinbuck, Martin Peter, and Susan Winandy. "A review of notch processing with new insights into ligand-independent notch signaling in T-cells." Frontiers in immunology 9 (2018): 1230.

4. Deng, San-Ming, et al. "The Notch ligand delta-like 3 promotes tumor growth and inhibits Notch signaling in lung cancer cells in mice." Biochemical and biophysical research communications 483.1 (2017): 488-494.

5. Venkatesh, Deepak, et al. "RhoA-mediated signaling in Notch-induced senescence-like growth arrest and endothelial barrier dysfunction." Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology 31.4 (2011): 876-882.

6. Smit MAD, Borghaei H, Owonikoko TK, et al. Phase 1 study of AMG 757, a half-life extended bispecific T cell engager (BiTE) antibody construct targeting DLL3, in patients with small cell lung cancer (SCLC). J Clin Oncol. 2019;37:TPS8577.

7. Frederickson RM. A new era of innovation for CAR T-cell therapy. Mol Ther. 2015;23:1795-1796.