免疫治疗 (Immunotherapy) 是指通过诱导、增强或抑制免疫反应来的疾病治疗方法。其中旨在引起或增强免疫反应的疗法被称为激活免疫疗法，而减少或抑制免疫反应的则称为抑制免疫疗法。
免疫疗法改变了癌症的治疗模式，尤其是免疫检查点抑制剂，在肺癌、黑色素瘤、结直肠癌等诸多癌症治疗方面取得了丰富的成果。近年来，包括PD-1/PD-L1、CTLA-4在内的多个免疫检查点抑制性抗体被FDA批准应用于癌症治疗。然而实验结果显示，只有25%左右患者能对上述靶点产生持久免疫反应，所以寻找作用人群更加广泛且持久的新免疫治疗靶点就显得尤为紧迫。
BTLA（B- and T-lymphocyte attenuator，CD272，B和T淋巴细胞衰减因子）是一种主要由B细胞和T细胞表达的共抑制受体，可抑制激活信号转导，其配体是HVEM（Herpesvirus entry mediator，疱疹病毒侵入介质）。BTLA与其他免疫检查点（例如PD-1和CTLA-4）有相似之处，但在表达及功能方面有所不同。HVEM是TNF受体家族成员，在诸如T细胞、B细胞、NK细胞、树突细胞、单核细胞和中性粒细胞等多种免疫细胞中广泛表达并参与免疫稳态，HVEM与BTLA结合会抑制T细胞和B细胞活化、增殖以及细胞因子生成。另外，HVEM在多种癌症中高表达，如小细胞肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤和结直肠癌等，因此靶向BTLA和HVEM在开发新肿瘤免疫治疗新方法中具有非常丰富的应用前景。
BTLA/HVEM通路[1]
HVEM和BTLA之间相互作用是最早被发现的Ig结构与TNFR家族之间的连接。HVEM除BTLA之外还有其他配体（图1），如CD160、LIGHT、淋巴毒素-α (LTα) 和单纯疱疹病毒糖蛋白D 。HVEM在调节T细胞中起到双重作用，HVEM与BTLA、CD160结合时触发共抑制信号，而HVEM与LIGHT、LTα结合则传递共刺激信号。因此，HVEM通常被描述为取决于所接合配体的分子开关[1]。
BTLA在肿瘤浸润淋巴细胞 (TILs) 中表达，常与抗肿瘤免疫反应受损有关。胆囊癌中BTLA表达上调具有抑制抗癌免疫的作用。肝细胞癌病例显示，循环CD4+ T细胞中BTLA表达水平显着升高，远高于CD8+ T细胞。
此外，弥漫性大B细胞淋巴瘤、黑色素瘤、肺癌患者的T细胞中，BTLA表达升高。BTLA升高会导致细胞产生部分功能障碍，BTLA与黑色素瘤细胞上的HVEM交联可抑制T细胞扩增和IFN-γ产生[2]。
研究显示，通过对BTLA/HVEM信号通路阻断，能使循环CD4+ T细胞和CD8+ T细胞加速分泌IFN-γ。如果采用联合疗法同时阻断BTLA和PD-1，可协同改善肿瘤特异性抗原CD8+T细胞的扩增与增殖。基于上述研究，BTLA/HVEM正逐渐被认定为下一代肿瘤免疫治疗热门通路靶点。
BTLA对T细胞介导的炎症疾病具有负向调节作用。 与野生型小鼠相比，BTLA-/-（BLTA双敲除）的小鼠过敏性气道炎症持续时间较长，并且炎症细胞募集也在增强。另外，BTLA-/-小鼠表现出的：DNFB介导的接触超敏反应、CD8+T细胞增殖和IFN-γ生成均有所增强。而上述效应都可被激动型抗BTLA抗体所逆转[2]。
BTLA被认为在预防自身免疫疾病方面发挥着至关重要的作用。BTLA的缺乏会导致小鼠表现出抗原特异性IgG反应增强，并对自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 敏感。BTLA的缺乏同样会导致自身免疫性肝炎的自发发生，其特征是转氨酶水平升高、出现界面性肝炎和肝点状坏死。在系统性红斑狼疮（SEL）患者中，表达BTLA的CD4+T细胞占比下降，而在疾病活动期，BTLA阳性T细胞显著减少[2]。
肿瘤中HVEM上调代表另一种类似于肿瘤细胞中高表达PD-L1、PD-L2与免疫细胞上PD-1结合的免疫逃逸机制。
HVEM在许多肿瘤细胞中高表达，并且显示肿瘤浸润T细胞呈BTLA阳性。此外，HVEM 高表达与显着较差的预后相关，一项针对136例胃癌活检组织的研究显示，HVEM表达上调与疾病进展和总体生存率下降相关。
在另一项关于胶质母细胞瘤的研究中，通过免疫组织化学方法对34个神经胶质瘤组织进行评估，HVEM表达集中于坏死周围区和微血管增殖区域。基于转录组学分析，HVEM表达与免疫细胞浸润和微环境中的基质细胞有关。HVEM表达还与PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG3和VISTA 的表达相关，因此该研究得出结论：HVEM在免疫和炎症反应（尤其是T细胞的激活）的调节中发挥着至关重要的作用。
因此，在多种血液与实体瘤中，大量影响肿瘤免疫逃逸的实验结果为HVEM的肿瘤作用机制研究提供了强有力的理论依据，并论证与评估了其作为免疫治疗主要候选靶点的极高潜力。
BTLA-HVEM作为潜力靶点，目前全球已有6款药物进入临床实验阶段，另有众多企业开始布局该赛道。
BTLA-HVEM药物开发进展
在免疫治疗中，PD-1/PD-L1发展至今已有十年之久并已成为极为热门的免疫药物开发靶点，相比之下虽然HVEM-BTLA机制发现相对较晚，但BTLA、HVEM靶向药作为单药与PD-1联用的潜力极大，已成为许多药企在免疫治疗领域未来十年的布局方向。
Human BTLA (Luc) Jurkat报告细胞株在Jurka细胞上过表达全长人BTLA受体，并转入受NFTA信号调控转录的Luciferase报告基因，在细胞内建立起靶点信号转导与Luciferase表达的相关性，通过监测发光信号值的变化评价相关药物的生物活性。
BTLA报告基因细胞株原理图
Human HVEM (Luc) HEK293报告细胞株在HEK293细胞上过表达全长人HVEM受体，并转入受NFκB信号调控转录的Luciferase报告基因，在细胞内建立起靶点信号转导与Luciferase表达的相关性，通过监测发光信号值的变化评价相关药物的生物活性。
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● BTLA功能细胞株表达验证-FACS
Expression analysis of human BTLA on Human BTLA (Luc) Jurkat Reporter Cell by FACS.
Human BTLA (Luc) Jurkat Reporter Cell (Cat. No. SCJUR-STF106) or negative control cell were stained with PE-labeled anti-human BTLA antibody.
● BTLA激活剂筛选应用案例
Inhibition of TCR activator-induced reporter activity by anti-human BTLA antibody.
Human BTLA (Luc) Jurkat Reporter Cell (Cat. No. SCJUR-STF106) was incubated with serial dilutions of antibodies stimulated by TCR activator. The EC50 of anti-human BTLA antibody is approximately 0.005 μg/mL.
● HVEM功能细胞株表达验证-FACS
Expression analysis of human HVEM on Human HVEM (Luc) HEK293 Reporter Cell by FACS.
Cell surface staining was performed on Human HVEM (Luc) HEK293 Reporter Cell (Cat. No. CHEK-ATF105) or negative control cell using PE-labeled anti-human HVEM antibody.
● HVEM激活信号验证-Human BTLA Stimulation
Response to human BTLA (FOLD).
Human HVEM (Luc) HEK293 Reporter Cell (Cat. No. CHEK-ATF105) was incubated with CHO/Human BTLA Stable
Cell Line (Cat.No.SCCHO-ATP110) at four different cell densities. The human BTLA overexpressing on CHO cells can activate HVEM signaling with the max induction fold 103.69 at the density of 8x104 cells/well.
Inhibition of human BTLA overexpressing on CHO cells induced reporter activity by anti-human BTLA antibody. Human HVEM (Luc) HEK293 Reporter Cell (Cat. No. CHEK-ATF105) was incubated with serial dilutions of antibodies in the presence of CHO/Human BTLA Stable Cell Line. The EC50 of anti-human BTLA neutralizing antibody is approximately 0.212 μg/mL.
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参考资料
1. BTLA-HVEM Couple in Health and Diseases:Insights for Immunotherapy in Lung Cancer. Front Oncol. 2021; 11: 682007.
2. Fourcade J, Sun Z, Pagliano O, Guillaume P, Luescher IF, Sander C, et al. CD8(+) T cells specific for tumor antigens can be rendered dysfunctional by the tumor microenvironment through upregulation of the inhibitory receptors BTLA and PD-1. Cancer Res (2012) 72:887–96. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-11-2637
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