ViruStop：ACRO疫苗研发及效价评估核心工具——抗体对&ELISA检测试剂盒

酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。与其他免疫检测相似，可使用单克隆抗体和多克隆抗体来检测分析物（如肽、蛋白、抗体和小分子）。该方法可以用于单份样品检测或高通量筛选。ELISA 测定可具有多种形式，每一种各有优缺点。

✔ 配对抗体：可以同时结合在一个抗原分子上的两个抗体。通常一个抗原分子拥有多个抗原决定簇，将抗原注射入动物体内进行免疫，针对不同的抗原决定簇会产生不同的抗体。产生的抗体具有特异性与专一性，即一个抗体分子只会特异性地结合一个抗原决定簇。两个针对不同抗原决定簇的抗体，有可能同时结合到抗原分子上。如果两个抗体同时结合到同一个抗原分子上，那么这两个抗体就是配对抗体^[1]。

✔ 配对抗体在夹心ELISA中的应用：利用双抗夹心法对目的抗原进行定性定量的检测，必须要用到特定于该抗原的不同表位的两种抗体，即匹配抗体对。其中一种作为捕获抗体包被于多孔板表面上以促进抗原的固定。另一种作为检测抗体经标记偶联后用于抗原的检测。夹心ELISA法进行检测时，选择针对同一种靶标、能识别其不同表位并能很好地协同工作的两种抗体非常重要。

市场上ELISA试剂盒的品质参差不齐，选择一款高品质试剂盒对于传染病相关的疫苗研发及评价工作十分重要。一款高品质的ELISA试剂盒通常会针对灵敏度，准确度，精密度，回收率，基质效应等指标进行全面的方法验证以确保符合验收标准。

✔ RS0-Y131（捕获抗体）活性验证数据

Immobilized HRSV (A) Pre-fusion glycoprotein F0, His Tag (MALS verified) (Cat. No. RSF-V52H7) at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Mouse IgG1 (14B3) (Cat. No. RS0-Y131) with a linear range of 0.098-3.125 ng/mL. The antibody does not bind HRSV (A) Post-fusion glycoprotein F0, His Tag (MALS verified) (Cat. No. RSF-V52H6) (QC tested).

✔ RS0-S286（检测抗体）活性验证数据

Immobilized HRSV (A) Pre-fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H7) at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Human IgG1 (12C6) (Cat. No. RS0-S286) with a linear range of 0.2-2 ng/mL. HRSV (A) Post-fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H6) is verified not recoginized by Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Human IgG1 (12C6) (Cat. No. RS0-S286) in low concentration (QC tested).

Immobilized HRSV (A) Pre-fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H7) at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Human IgG1 (12C6) (Cat. No. RS0-S286)/Anti-Fusion glycoprotein F0 Antibody, Human IgG1 (D25) with a linear range of 0.1-2 ng/mL. HRSV (A) Post-fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H6) is verified not recoginized by Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Human IgG1 (12C6) (Cat. No. RS0-S286)/Anti-Fusion glycoprotein F0 Antibody, Human IgG1 (D25) in low concentration (Routinely tested).

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✔ RSV-Pre-F0抗原检测试剂盒相关验证数据

对（RAS-A163）试剂盒基质效应、灵敏度及线性、选择性、稀释线性、精密度、 准确度、重现性和耐用性进行了方法验证。

✦ 灵敏度及线性

Immobilized Anti-Pre-Fusion glycoprotein F0 (RSV) Antibody can bind Pre-Fusion glycoprotein F0 (RSV). Detection was performed using HRP-Anti-Pre-Fusion glycoprotein F0 (RSV) Antibody with sensitivity of 3.1 ng/mL (QC tested).

✦ 基质效应

将不同浓度标准品加入50%1640和50%DMEM培养基中，与加入不含培养基(0.5%BSA)进行对比，RSD（OD 值)＜10%，建议样本MRD=1:2。

✦ 稀释线性

将高浓度的标准品加入到1640和DMEM培养基中，进行梯度稀释，在不同稀释比例下的回收率均在 80-120%范围内。

✦ 准确度

设置四个质控点浓度，每个质控点浓度重复20遍，回收率均在80-120%范围内。

✦ 精密度

板内精密度：4个已知浓度的样本酶标板内重复测试20次，以评估酶标板内的精密度。板间精密度：4个已知浓度的样本酶标板间重复测试3次，以评估酶标板间的精密度。

经验证该项目的批内变异系数（CV＜10%）/批间变异系数（CV＜10%），均满足试剂盒申明的标准范围，能够满足实验室要求，可用于日常项目检测使用。

✔ RSV-Pre-F0 IgG抗体检测试剂盒相关验证数据

对（RAS-T161）试剂盒MRD、cutoff值、专属性、线性及线性范围、精密度和准确度、耐用性进行了方法验证。

✦ 精密度

批内精密度：7个样本批内重复测试10次，以评估批内的精密度。

批间精密度：7个样本批间重复测试3次，以评估批间的精密度。

经验证该项目的批内变异系数（CV＜10%）/批间变异系数（CV＜10%），均满足试剂盒申明的标准范围，能够满足实验室要求，可用于日常项目检测使用。

✦ 准确度

设置三个质控点浓度，每个质控点浓度重复10次，回收率均在80-120%范围内。

✦ 典型数据

参考资料来源

[1]丁香园