【厚积薄发】RSV疫苗巨轮已启动

抗原的设计对于疫苗的有效性十分重要，合适的抗原可以诱导机体产生体液免疫、细胞免疫，从而使病原体失去致病力。在RSV疫苗的抗原选择上，科学家走了不少弯路才迎来了胜利的曙光。在RSV的8种结构蛋白中，F蛋白是研制RSV疫苗的首选抗原。RSV的F蛋白以跨膜三聚体形式存在，三个相同的单体通过部分相互缠绕而形成，具有融合前pre-F和融合后post-F两种构象。

《新英格兰医学杂志》上的一篇研究表明，使用融合后post-F作为抗原的RSV疫苗进行的五项三期试验中，没有一种疫苗能将中和活性提高5倍以上。最终，研究人员发现，post-F构象的蛋白抗原性较差，不足以激发足够强的保护效果。

RSV F 蛋白介导的融合过程（10.1038/s41579-019-0149-x）

融合前Pre-F构象的三聚体RSV F蛋白通过C末端跨膜结构域锚定在病毒包膜上，其顶端存在被高中和活性抗体靶向的表位，F蛋白重排（在病毒膜上自发重排，或者与宿主细胞膜形成融合孔后重排）成Post-F构象之后，表位消失。因此，保留顶端中和敏感表位的Pre-F构象蛋白是RSV疫苗开发的首选抗原。

RSV-F蛋白抗原表位及抗体结合情况

经历60年的潜心研究，呼吸道合胞病毒（RSV）预防领域近年来捷报频传。今年5月，FDA批准了两款RSV疫苗——葛兰素史克的Arexvy和辉瑞的Abrysvo，两款重组蛋白疫苗均获批用于60岁以上成年人。7月5日，Moderna宣布递交RSV mRNA疫苗mRNA-1345的全球上市申请。以预防2种或更多RSV相关下呼吸道症状（RVS-LRTD2）的有效率作为统一临床终点，辉瑞、Moderna、葛兰素史克疫苗保护率分别为66.7%、83.7%、94.1%。

上述三期临床成功的三款RSV疫苗，均选择了pre-F蛋白作为抗原。辉瑞的RSV疫苗抗原，分别来自RSV A与RSV B病毒亚型的pre-F蛋白，是三款疫苗中唯一使用双价抗原的产品；葛兰素史克和Moderna的RSV疫苗抗原则均以DS-Cav1为基础。DS-Cav1是2013年中美科学家联合设计的pre-F抗原。

葛兰素史克的疫苗，是基于DS-Cav1的序列基础，通过引入半胱氨酸残基稳定在其融合前构象，形成二硫键，从而稳定蛋白质的构象或寡聚状态；Moderna则选择在DS-Cav1的基础上，增加两个位点突变，使得DS-Cav1三聚体的单体之间增加了额外的二硫键，让三聚体结构更稳定。

RSV F蛋白构象对疫苗开发和评估过程至关重要，Pre-F形式可以诱导更有效的中和抗体，Post-F可以用作筛选Pre-F特异性抗体时的对照。ACROBiosystems百普赛斯为支持RSV相关研究及疫苗研发，推出RSV StrainB1/A2经特殊设计三聚体构象的融合前Pre-F、融合后Post-F以及G蛋白；RSV-F0广谱抗体和Pre-F0特异性抗体（包含配对抗体）、Pre-F0抗原及抗体检测试剂盒等RSV疫苗研发整体解决方案！

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✦ 特殊设计的天然构象：经特殊设计具有天然三聚体构象的融合前Pre-F蛋白、融合后Post-F蛋白以及G蛋白；

✦ 产品类型丰富：覆盖正确构象的RSV Pre-F、Post-F和G蛋白、RSV-F0广谱抗体和Pre-F0特异性抗体、Pre-F0抗原及抗体检测试剂盒；

✦ 高纯度：经SDS-PAGE及SEC-MALS验证纯度>90%；

✦ 高活性：经ELISA验证Pre-F及Post-F蛋白与其特异性抗体结合能力强；

✦ 高免疫原性：天然构象RSV-F和G蛋白可诱导产生更高的抗体滴度。

✔ 经SEC-MALS验证Pre-F三聚体蛋白纯度>90%

The purity of HRSV (A) Fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H7) is more than 90% and the molecular weight of this protein is around 175-200 kDa verified by SEC-MALS.

✔ 经ELISA验证，Pre-F三聚体蛋白与Pre-F特异性抗体（D25）结合线性范围为0.2-1 ng/mL

Immobilized HRSV (A) Fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H7) at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Anti-Fusion glycoprotein F0 Antibody, Human IgG1 (D25) with a linear range of 0.2-1 ng/mL (QC tested).

RSV配对抗体

Immobilized HRSV (A) Pre-fusion glycoprotein F0, His Tag (MALS verified) (Cat. No. RSF-V52H7) at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Mouse IgG1 (12C6) (Cat. No.RS0-Y132)with a linear range of 0.098-3.125 ng/mL. The antibody does not bind HRSV (A) Post-fusion glycoprotein F0, His Tag (MALS verified)(Cat. No. RSF-V52H6)(QC tested).

Immobilized HRSV (A) Pre-fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H7) at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Human IgG1 (12C6) (Cat. No. RS0-S286) with a linear range of 0.2-2 ng/mL. HRSV (A) Post-fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H6) is verified not recoginized by Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Human IgG1 (12C6) (Cat. No. RS0-S286) in low concentration (QC tested).

Immobilized HRSV (A) Pre-fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H7) at 1 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Human IgG1 (12C6) (Cat. No. RS0-S286)/Anti-Fusion glycoprotein F0 Antibody, Human IgG1 (D25) with a linear range of 0.1-2 ng/mL. HRSV (A) Post-fusion glycoprotein F0, His Tag (Cat. No. RSF-V52H6) is verified not recoginized by Monoclonal Anti-RSV-Pre-F0 specific Antibody, Human IgG1 (12C6) (Cat. No. RS0-S286)/Anti-Fusion glycoprotein F0 Antibody, Human IgG1 (D25) in low concentration (Routinely tested).

Immobilized HRSV (A) Pre-fusion glycoprotein F0, His Tag (MALS verified) (Cat. No. RSF-V52H7) at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-RSV-F0 broadly Antibody, Mouse IgG1 (3B4) (Cat. No. RS0-Y161)with a linear range of 0.098-3.125 ng/mL (QC tested).

ELISA检测试剂盒

对（RAS-A163）试剂盒基质效应、灵敏度及线性、选择性、稀释线性、精密度、 准确度、重现性和耐用性进行了方法验证。

● 灵敏度及线性

Immobilized Anti-Pre-Fusion glycoprotein F0 (RSV) Antibody can bind Pre-Fusion glycoprotein F0 (RSV). Detection was performed using HRP-Anti-Pre-Fusion glycoprotein F0 (RSV) Antibody with sensitivity of 3.1 ng/mL (QC tested).

● 基质效应

将不同浓度标准品加入50%1640和50%DMEM培养基中，与加入不含培养基(0.5%BSA)进行对比，RSD（OD 值)＜10%，建议样本MRD=1:2。

● 稀释线性

将高浓度的标准品加入到1640和DMEM培养基中，进行梯度稀释，在不同稀释比例下的回收率均在 80-120%范围内。

● 准确度

设置四个质控点浓度，每个质控点浓度重复20遍，回收率均在80-120%范围内。

● 精密度

板内精密度：4个已知浓度的样本酶标板内重复测试20次，以评估酶标板内的精密度。板间精密度：4个已知浓度的样本酶标板间重复测试3次，以评估酶标板间的精密度。

经验证该项目的批内变异系数（CV＜10%）/批间变异系数（CV＜10%），均满足试剂盒申明的标准范围，能够满足实验室要求，可用于日常项目检测使用。

对（RAS-T161）试剂盒MRD、cutoff值、专属性、线性及线性范围、精密度和准确度、耐用性进行了方法验证。

● 精密度

批内精密度：7个样本批内重复测试10次，以评估批内的精密度。

批间精密度：7个样本批间重复测试3次，以评估批间的精密度。

经验证该项目的批内变异系数（CV＜10%）/批间变异系数（CV＜10%），均满足试剂盒申明的标准范围，能够满足实验室要求，可用于日常项目检测使用。

● 准确度

设置三个质控点浓度，每个质控点浓度重复10次，回收率均在80-120%范围内。

● 典型数据