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基质胶百科全书|您的疑问由我们来解答

2023-08-17 16:47    浏览量:1647


随着科学研究的不断深入,3D细胞培养的优势日益突出,越来越多的科研工作者将3D细胞培养系统应用于肿瘤生长、药物研发、组织修复/再生以及疾病模型等。与体内系统相比,3D细胞培养系统在时间和成本上更具有优势,且更加有望于转化到临床。

然而,寻找到合适的基质胶产品并正确使用是推进研究的第一步!

特此我们为您收集整理了有关基质胶产品的问题,并为您作出解答~


Q1
如此多版本的基质胶该如何选择?

A: 

基质胶的选择


Q2
实验前需要提前多久解冻基质胶?

A: 以标准型基质胶为例,对于全新未拆封产品,冷冻状态下基质胶可在使用前一天埋于冰中转移至2-8℃环境,次日使用;或者在操作前4h暴露于4℃环境解冻,立刻使用;对于已经封装好的基质胶(500 μL为例),冷冻基质胶在使用前30min于4℃环境下解冻即可使用。


Q3
基质胶最低凝胶限度?

A: 建议使用时稀释浓度不低于4mg/mL,并保证基质胶完全溶解于稀释体系中。


Q4
基质胶铺板时如何判断基质胶是否已经凝固并可进行下一步
操作?

A: 标准型浓度的基质胶(8-13mg/mL)的凝胶时间约为20-30 分钟,而高浓度型基质胶(16-26mg/mL)凝胶时间约为3分钟,37℃环境孵育并确保凝胶时间充足的条件下,可观察到基质胶在底层形成薄层凝胶,即可判断基质胶已经凝固。


Q5
进行一次侵袭实验需要准备多少基质胶呢?

A: 对于24孔板的Transwell小室,建议使用将标准浓度进行1:8稀释后,以60 μL稀释液进行铺胶;我们对于标准型基质胶Mogengel Matrix (Acro Certified)(Cat.No. AC-M082704)和Mogengel Matrix (Phenol Red Free) (Acro Certified) (Cat.No. AC-M082706)都进行了侵袭验证,同时提供了不同稀释比例(1:6和1:4)的肿瘤细胞侵袭效果,可作为实验参考。

侵袭实验需要的基质胶

经验证,以不同浓度标准型基质胶(Cat. No. AC-M082704)作用24h后,检测到5×104 SGC-7901的侵袭,且随着基质胶浓度的增 加,成功侵袭的细胞数明显减少。

经验证,以不同浓度标准型无酚红基质胶(Cat.No. AC-M082706)作用24h后,检测到5×104 SGC-7901的侵袭,且随着基质胶浓度的增加,成功侵袭的细胞数明显减少。


Q6
2D贴壁细胞培养需要用到基质胶吗?

A: 2D贴壁细胞也可以用,基质胶是可以促进细胞贴壁的,尤其是iPSC。


Q7
基质胶能够诱导ES/iPSC细胞分化吗?

A: 诱导分化不取决于基质胶,这是由培养基定向分化完成的。Mogengel Matrix IPSC Level(Acro Certified)(Cat.No. AC-M082777)可以维持干细胞培养,并保持干性,有利于后续定向分化。


Q8
类器官长得越大越好吗?

A: 不是的,类器官培养过程中需要观察生长尺寸,并通过传代等方式控制。由于类器官内部缺乏循环系统,当类器官尺寸较大时,靠近中心的细胞难以和外界进行氧气和营养成分的交换,容易引起凋亡,不利于后续检测。


Q9
培养的类器官可以传多少代?

A: 一般情况下实现稳定传代可以维持至少3代以上的扩增,部分类器官可实现10次以上扩增,且多次传代后仍然可以保留原有形态

类器官培养基质胶

经验证,低因子无酚红基质胶(Cat. No. AC-M082703)和类器官培养版本基质胶(Cat. No. AC-M082755)可维持类器官传代的稳定性,与C公司同类产品效果相当。小鼠小肠类器官长期扩增超过7代,均维持典型类器官出芽形态。

经对比验证,低因子无酚红基质胶(Cat. No. AC-M082703)和C公司的同类产品均可维持人胃癌类器官生长。连续传至三代观察发现,特征一致,均呈典型囊泡样结构。


Q10
体内成瘤推荐哪一款基质胶?

A: 推荐使用Mogengel Matrix (HC) (Acro Certified)(Cat. No. AC-M082724), 经体内成瘤实验验证,能显著促进裸鼠皮下肿瘤增殖。

体内成瘤基质胶

经体内成瘤实验验证,与对照组和C公司同类产品相比,不同批次的高浓度基质胶(Cat. No. AC-M082724)能显著促进裸鼠皮下肿瘤增殖。


Q11
在混合基质胶的体内成瘤实验中,从注射到形成较为明显的肿瘤需要多久?

A: 一般来说,注射后一周基质胶基本被吸收了,大概一周左右会开始形成明显的肿瘤,不同细胞时间不一样,注射细胞量不一样时间也不一样。


Q12
做血管生成实验,使用标准型基质胶还需稀释吗?以及不同规格培养板基质胶的铺板体积是多少?

A: 可以稀释基质胶,按照基质胶:培养基=2:1的比例进行稀释;铺板体积可参照表1进行。

血管生成基质胶


Q13
在血管生成实验中,如何把握观察结果的时间?

A: 成管时间与细胞状态密切相关。细胞状态好时,2-3小时开始成管;细胞状态较差时,可能18-24h成管;如果使用原代内皮细胞而非永生化细胞,开始成管的时间会延迟几个小时。建议首次实验时,每4小时观察一次。


Q14
Mogengel Matrix (GFR Phenol Red Free) (Acro Certified)(Cat. No. AC-M082703)里面Collagen IV, laminin, entactin的浓度范围各是多少?如何保证这个浓度的批次稳定呢?

A: 这三者占比分别为laminin 为60%,Collagen IV 30%,entactin 8%。对于不同批次基质胶产品各个蛋白组分含量的情况,我们都有蛋白SDS-PAGE电泳图作为验证,如果需要可以提供。


Q15
基质胶蛋白浓度一般在8-13mg/mL,如何控制批次间差异?

A: 天然提取的基质胶蛋白会存在一定批间差,实际得到的一般都是10mg/mL左右,基质胶产品的COA中会体现具体浓度。




以上的问答是否解决了您对于基质胶的疑问吗?

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