人Th1/Th2细胞因子检测在细胞与基因疗法研发中的重要性

CRS（Cytokine Release Syndrome，细胞因子风暴）是一种与免疫系统过度反应有关的疾病状态，通常与白血病和淋巴瘤等疾病的治疗有关，免疫细胞受到激活，释放大量细胞因子，导致身体出现过度炎症反应。CRS的严重程度可以从轻微到严重不等，严重情况下可能需要积极治疗。早在2006年，CD28的超级激动剂TGN1412在1期临床试验中诱发CRS，造成了灾难性后果，6名健康志愿者均发生了严重的系统性炎症反应，健康受试者在短暂时间内变成“大象人”。特别是CAR-T细胞疗法，FDA批准上市了6款CAR-T产品，在其临床试验设计中，均考虑CRS短期安全性问题。Abcema是第一款 FDA 批准上市的靶向BCMA的CAR-T疗法，如下图所示，是其预测CRS风险检测的相关细胞因子。

在CRS的研究中，研发科学家和临床医生通常关注免疫系统的不同分支，如Th1和Th2细胞，它们属于辅助T淋巴细胞的两个亚群，Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α等，主要介导细胞毒和局部炎症有关的免疫应答，辅助抗体生成，参与细胞免疫及迟发型超敏性炎症的发生，故称为炎症性T细胞；Th2细胞主要分泌IL-4、IL-6、IL-10等，与B细胞增殖、分化、成熟有关，能促进抗体生成，增强抗体介导的体液免疫应答。在正常情况下，机体中Th1和Th2处于相对平衡的状态，但它们的不平衡可能与炎症性疾病和免疫相关疾病有关。因此，对Th1/Th2平衡的检测和监测对于了解CRS和其他免疫相关疾病的发展和治疗至关重要。

目前，关于细胞因子的释放监测和检测，国内外监管机构先后发布了相关研究技术指导原则，为免疫药物或疗法的安全性评价提供参考：

- FDA发布的《Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein Products》中提到“When evaluation of cytokine release is included in animal testing, measurement of a cytokine panel that is as broad as possible and includes IL-2, IL-6, IFN-γ, and TNF-α, as well as other relevant cytokines indicative of cytokine release syndrome, is recommended”；

- EMA发布了《Guideline on Immunogenicity assessment of biotechnology-derived therapeutic proteins》，不过未对技术细节做明确的规定；

- NMPA发布的《药物免疫原性研究技术指导原则》将体外细胞因子试验提到法规层面，对体外细胞因子试验的策略、基本观察指标做了相对具体的要求，基于细胞因子释放机制设计合适的体外细胞因子释放试验，如果药物直接靶向免疫细胞，可采用外周血单个核细胞进行试验，如果机制可能与FcyRs结合相关，则更适合在包含表达FcyRs细胞的全血中进行试验，观察指标包括但不限于IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α。

利用体外实验系统评估药物诱发细胞因子释放的潜在风险，已经成为危险识别和潜在风险评估的工具。体外细胞因子释放实验 (cytokine release assays，CRA)研究目前也取得很大进展，已有多种CRA方法用于预测CRS发生的风险。国内外监管机构的考察指标如下图所示，显而易见，IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α的检测非常必要。

ClinMax^TM多因子检测原理

- 样本用量少：最低仅需10μL样本；

- 检测时间短：仅需2.5h即可完成检测，支持一个工作日内重复；

- 操作步骤少：磁珠、样本、检测抗体共同加入进行孵育，减少洗涤；使用磁吸附，简单易行，减少离心操作，避免磁珠丢失；

- 检测范围宽：10000-9.7pg/ml；

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