MHC-多肽复合物——天然构象不容忽视！

MHC-I分子是由一条α链和一条轻链（β2-微球蛋白，β2M）以非共价连接组成的异源二聚体，完整的、具有天然构象的MHC分子在药物开发中至关重要，而W6/32单克隆抗体作为一种独特的构象敏感抗体，常被用于MHC-peptide天然构象分析验证。W6/32的识别表位主要是HLA I类分子中的HLA-A,B,C三种亚型，但是它的稳定识别依赖于HLA分子α链的三维构象及β2M分子的N端结构。 早年前，M.J. Shields等发现，在结构和生物化学研究中广泛使用的细菌表达的重组β2M，通常在其氨基端具有额外的甲硫氨酸，重组表达的β2M与native MHC-I分子及特异性肽段重构后，可与各种HLA特异性单克隆抗体结合，但不与W6/32抗体结合；当更换为天然的β2M进行重构时，复合物可被W6/32抗体以及其它HLA 特异性单克隆抗体所识别，此结果显示W6/32抗体对β2M氨基端非常敏感。

W6/32(HLA/通用抗体)和 BB7.2(HLA-A2特异性抗体) 与不同HLA-A2多肽复合物（包含天然/重组的人源B2M）的结合活性. doi: 10.1111/j.1399-0039.1998.tb02994.x. 

因此，W6/32单克隆抗体作为独特的MHC空间构象敏感的识别抗体，可以用于表征MHC分子是否具有天然正确构象，因此被广泛应用于MHC的鉴定和相关研究中。在进行MHC I-肽复合物稳定性、Tapasin促进折叠程度与多肽免疫原性的相关性研究中，研究人员曾使用MHC-I构象特异性抗体W6/32来质控MHC多肽复合物的重构及稳定性；Clarety等为了探索影响CD8+ T细胞免疫优势的因素，利用W6/32单克隆抗体验证了186个优化的HIV抗原表位在18个HLA等位基因上的结合，评估了不同抗原表位对细胞表面HLA I类多肽复合物分子稳定性的贡献，为HIV病原控制和以T细胞为基础的疫苗设计提供重要参考意义。

通过W6/32单克隆抗体检测HLAI类-肽复合物，MFI值反应HLA分子的稳定程度.Cell Rep. 2021;36(2):109378.

目前，MHC-多肽复合物常用于TCR-T疗法、TCR蛋白药、类TCR抗体等药物的开发过程中，尤其是在TCRm抗体筛选中，完整的、具有天然构象的MHC分子是最理想的抗原，而人为引入的突变及附加的表达元件等都可能引起复合物结构或构象的变化，因此开发出高质量天然构象的MHC-多肽复合物分子一直是行业难点。

ACROBiosystems Peptide-MHC四聚体采用异源二聚体共表达方式，模拟天然构象，可以被anti-HLA class I antibody(W6/32) 识别，同时具备优秀的生物学活性，被特异性抗体有效识别，是免疫、抗体筛选、TCR筛选的不二之选。

 ✦ ACROBiosystems自主研发的具有天然构象的Human HLA-A*02:01&B2M&NY-ESO-1 (SLLMWITQC) Complex Protein与Anti-HLA class I antibody(W6/32)抗体的结合活性远高于竞品。

Immobilized Biotinylated Human HLA-A*02:01&B2M&NY-ESO-1 (SLLMWITQC) Complex Protein (Acro) at 1 μg/mL (100 μL/well on streptavidin precoated (0.5 μg/well) plate can bind Anti-HLA class I Antibody, Human IgG1 (W6/32) with a linear range of 0.1-4 ng/mL, but the similar protein from Company K can’t.

✦ ACRO/竞品Human HLA-A*02:01&B2M&NY-ESO-1 (SLLMWITQC) Complex Protein分别与特异性抗体Anti-NY-ESO-1 Antibody的结合活性无差异。

Immobilized Biotinylated Human HLA-A*02:01&B2M&NY-ESO-1 (SLLMWITQC) Complex Protein (Acro or Company K) at 1 μg/mL (100 μL/well) on precoated (0.5 μg/well) plate both can bind Anti-NY-ESO-1 Antibody, Human IgG1 with a linear range of 0.0001-0.016 μg/mL.