【resDetect™品牌推荐】高灵敏、更好普适性的Protein A残留检测试剂盒

治疗性抗体如单克隆抗体、双特异性抗体、以及抗体片段几乎占据了治疗性生物制品的半壁江山，各大药企的竞争十分激烈，其中下游纯化工艺是药物开发的关键环节。主流的抗体纯化通常包含三步层析、两步过滤、以及病毒灭活和浓缩换液等，而Protein A因与IgG的Fc片段具有高特异性而广泛应用于抗体的纯化阶段，Protein A亲和层析是抗体纯化捕获阶段的“金方法”，对于整个抗体的纯化来说具有重要意义。

常见Protein A亲和填料类型

实际上，市面上已有多种Protein A被用于药物生产工艺中，常见的Protein A亲和配基有：

■ 天然Protein A：无动物来源组分，这种传统的Protein A亲和层析载量仅在20-30g/L左右，纯化通量较低。

■ 重组Protein A：C端新增一个Cysteine，可以单一位点定向偶联于琼脂糖基架上，降低与抗体接触的空间位阻，提高了载量，约50mg人IgG/mL。pH耐受范围广，可耐受0.5 M NaOH和0.5M HCl 处理，不降解; 抗体结合能力不变, 非特异性结合明显降低。

■ MabSelect SuRe™：无论天然Protein A还是重组Protein A依然存在对NaOH高度敏感，在强碱性条件下易变性或脱落。后经研究发现，在重组Protein A的5个结合结构域中，B位点的结合IgG能力最强，通过将B位点对碱敏感的Asp氨基酸突变为耐碱的氨基酸，其耐碱性大大提高，然后对该区段进行复制，得到新的四聚体配基SuRe Ligand，其载量更高，避免了Protein A中不同IgG结合结构域与抗体Fc段亲和性的差异，使得洗脱条件更加均一而温和。

■ MaXtar^® ARPA ligand：动态结合载量(DBC)约为68mg/ml，通过采用高耐碱性的Protein A配基，在每个循环均使用0.5M NaoH，15min进行CIP处理，运行200个cycle以后，其动态结合载量(DBC)依然保留其原始载量的90%以上。

Protein A残留质控

当使用Protein A亲和层析进行抗体纯化时，Protein A有一定概率可与抗体同时从填料中析出，这种现象称为“Protein A Leaching”，尤其是当色谱柱循环使用老化时，更容易脱落Protein A导致抗体污染，这可能对抗体药物造成严重的的安全性隐患和有效性影响。因而，对使用Protein A亲和层析填料纯化出的抗体制剂中残留Protein A的检测，是抗体药物制剂生产过程中关键的质量控制步骤，国内外药品监管机构也发布了相关的技术要求文件，为抗体药物的研发和生产提供了参考。但值得注意的是，面对市面上多种多样的商业化Protein A亲和填料类型，选择一款灵敏快速、尤其是普适兼容性强的Protein A残留检测工具是药物工艺质控环节需要考量的关键要素。

ACROBiosystems百普赛斯 Protein A残留检测试剂盒

检测原理示意图

本试剂盒适用于天然或结构保守的重组Protein A，以及生物工艺制造应用中各种耐碱性重组 Protein A 如MabSelect SuRe^TM、MaXtar^® ARPA ligand 等的快速检测。

✔ 普适性：适用于检测天然或结构保守的重组Protein A和各种常见的耐碱性Protein A突变体，如MabSelect SuRe™和其他Protein A亲和配基；

✔ 快速：2小时内完成检测。

✔ 准确性： Protein A标准品按照药典方法进行严格定量和溯源，通过中检院牛血清白蛋白（BSA）中国国家标准（NIFDC代码:140619）进行严格定量，具有可追溯性；

✔  严格的方法学验证：可根据要求提供符合ICH标准的验证报告；

✔ 高灵敏度：重组Protein A，MabSelect SuRe™ Protein A和其他Protein A的灵敏度< 20 pg/mL；

✔ 高浓度IgG耐受性：准确定量高达10 mg /mL抗体中的Protein A水平；

✔ 良好的缓冲液兼容性。

本试剂盒包含三种不同种类的Protein A标品，分别是Recombinant Protein A Standard，Alkali-Tolerant Recombinant Protein A Standard 以及MaXtar^® ARPA ligand Protein A Standard (Bio-Link Co.) ，针对不同的Protein A亲和层析填料的配基残留检测，推荐使用的标准品如下：

ACROBiosystems百普赛斯 Protein A残留检测试剂盒具有很好的回收率（80-120%），除Mabselect SuRe^TM和MaXtar^® ARPA ligand之外，还测试了市面上三种耐碱亲和介质，数据显示均具有理想的回收率和兼容性，具有很好的通用性。

✔ 典型数据

可识别和检测各种不同结构的Protein A，包括天然或结构保守的重组Protein A以及生物工艺制造应用中常用的MabSelect SuRe^TM，MaXtar^® ARPA ligand等各种耐碱Protein A亲和配基。

标准曲线是由ACRO自产的高纯度高灵敏的重组Protein A系列稀释后经4-PL拟合得到，检测范围在25-1600pg/mL，R²可达到0.99。

标准曲线是由ACRO自产的高纯度高灵敏的耐碱性重组 Protein A系列稀释后经4-PL拟合得到，检测范围在25-1600pg/mL，R²可达到0.99。

标准曲线是由百林科Bio-Link自产的高纯度高灵敏的MaXtar^® ARPA ligand Protein A系列稀释后经4-PL拟合得到，检测范围在25-1600pg/mL，R²可达到0.99。

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The following recovery tests were conducted by adding different concentrations of Protein A to Human IgG1（Bevacizumab）, and the final concentration of Human IgG1（Bevacizumab）is 10mg/mL to calculate the recovery rate. For Recombinant Protein A, Alkali-Tolerant Recombinant Protein A and MaXtar^® ARPA ligand Protein A (Bio-Link Co.), the recovery ranges are 98-118%, 86-109% and 79-106%, respectively.

✔ 高精密度

Intra-Assay：Three samples of known concentration were tested ten times on one plate to assess intra-assay precision, Intra-Assay Precision CV＜10%.

Inter-Assay：Three samples of known concentration were tested in ten separate assays to assess inter-assay precision, Inter-Assay Precision CV<20%.

✔ 专属性

在不同检测样本中分别加入高于通常质量标准限度的宿主细胞蛋白（HCP 500ng/mg）和宿主细胞DNA（HCD 0.5ng/mg），然后分别加入1600pg/mL、300pg/mL、25pg/mL Protein A，加入与未加入HCP和HCD的Protein A加标样品中Protein A回收的比值，作为专属性验证指标。

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文献参考

1.https://mp.weixin.qq.com/s?__biz=MjM5NTI3MDE0NQ==&mid=2653697210&idx=2&sn=21c3f2f24a9416eda5412a0ba52197b7&chksm=bd238fd48a5406c2cb8424a02d2cab771067276a5a94edf575e887b64b05720f02c10b25edf7&scene=27

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