随着基因工程技术在肿瘤治疗应用中的快速发展,以CAR-T为代表的免疫细胞疗法已在白血病、淋巴瘤等血液肿瘤患者治疗中展现出显著的临床效果。实际上,“CAR”是影响CAR细胞疗法有效性的关键,相关法规文件明确要求CAR表达阳性率检测是药物质控的重要指标之一。CAR检测几乎贯穿CAR细胞药物的整个开发周期:如早期研发CAR的表达确认、CMC质控阶段CAR细胞阳性率质控、临床阶段CAR药物的PK研究等,因此,选择合适的CAR表达检测试剂对于药物的成功开发至关重要。
目前,市面上已有多种CAR检测试剂/工具,它们大多数是基于CAR的不同结构区域而设计开发,有针对CAR抗原结合位点的,比如抗原蛋白和抗独特型抗体;或针对通用domain的,比如结合κ轻链Protein L蛋白,结合Fab的抗Fab抗体,针对CAR Linker的抗CAR Linker 抗体等。整体来看,这些CAR阳性率检测试剂均有各自的优劣势,可根据实际应用需求来选择。
Comparison of the Pros and Cons of CAR Detection Reagents. Front Immunol. 2020;11:1770.
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◎ CAR结构展示
整个CAR分子是模块化的合成受体,主要由4个部分组成:细胞外靶抗原结合结构域、铰链区域、跨膜结构域、一个或多个细胞内信号结构域。其中,细胞外靶抗原结合结构域,赋予了CAR细胞对特定抗原的识别能力,也是CAR阳性率检测时常用的结合区域,该结构由单克隆抗体的可变重链(variable light, VH)和可变轻链(variable light, VL)组成,并由一个灵活的连接器Linker连接,形成单链可变片段(single-chain variable fragment, scFv),特异性地结合肿瘤细胞表面的抗原。
Structure of chimeric antigen receptors (CARs) incorporated in the membrane of a T cell. Source: Jayapriya et al. EBioMedicine. 2020.
ACROBiosystems百普赛斯全面布局CAR阳性率检测产品线,可提供50多种CAR靶点抗原蛋白(覆盖PE/FITC/APC/Alexa Fluor等荧光标记类型)、高灵敏抗独特性抗体、Protein L等,满足早期研究、CMC质控、临床等不同阶段对CAR检测试剂的不同需求,获得了全球多家客户的高度认可并达成长期合作。
在此基础上,我们为更好满足市场需求,现全新推出一款通用型CAR检测工具——Anti G4S Linker Antibody,包括APC荧光标记、PE荧光标记、非标记等多种产品形式,经FACS流式验证,可高特异、高灵敏结合G4S Linker CAR细胞,具有高普适性,全面助力细胞疗法药物的开发进程。
◎ 关于G4S Linker:
是一种抗体表达和设计使用最为广泛的柔性氨基酸链,序列为(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n。可通过重复次数“n”,来优化GS氨基酸链的长度,以实现抗体或蛋白功能域的适当分隔,或维持必要的区域间相互作用。目前,多种CAR的构建体分别利用了(Gly4Ser)3或(Gly4Ser)4氨基酸链,这也是普遍认为的最佳氨基酸链长度:15-20个氨基酸的范围。
通用型CAR检测工具——Anti G4S Linker Antibody
货号 |
产品描述 |
APC-Labeled Monoclonal Anti-G4S linker Antibody, Mouse IgG1 (163) (Site-specific conjugation) |
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PE-Labeled Monoclonal Anti-G4S linker Antibody, Mouse IgG1 (163) (Site-specific conjugation) |
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Monoclonal Anti-G4S linker Antibody, Mouse IgG1 (163) |
✎ 普适性好:可特异性结合具有G4S Linker设计的CAR细胞;
✎ 高灵敏度和高特异性:经类CAR细胞批检放行;
✎ 极低非特异信号:经PBMC双染验证;
✎ 高稳定性:重构后在2-8℃条件下可以稳定保存1年。
✔ 经流式验证,APC荧光标记抗4GS Linker抗体可高特异与Anti-MSLN (G4S)4 类CAR细胞结合。
5e5 of Anti-MSLN CAR-293 were stained with 100 μL of working solutions of APC-Labeled Monoclonal Anti-G4S linker Antibody, Mouse IgG1 (163) (Site-specific conjugation)(Cat. No. G4S-AFM664) and isotype control antibody respectively, washed analyzed with FACS. APC signal was used to evaluate the binding activity (QC tested).
✔ 经流式验证,APC荧光标记抗4GS Linker抗体可高特异与Anti-CD19 (G4S)3 类CAR细胞结合。
5e5 of Anti-CD19 CAR-293 were stained with 100 μL of working solutions of APC-Labeled Monoclonal Anti-G4S linker Antibody, Mouse IgG1 (163) (Site-specific conjugation)(Cat. No. G4S-AFM664) and isotype control antibody respectively, washed analyzed with FACS. APC signal was used to evaluate the binding activity(QC tested).
✔ 极低非特异:APC荧光标记抗4GS Linker抗体经与未转染CAR的PBMC细胞流式验证,无非特异背景问题。
5e5 of non-transduced PBMCs were stained with APC-Labeled Monoclonal Anti-G4S linker Antibody, Mouse IgG1 (163) (Site-specific conjugation)(Cat. No. G4S-AFM664) and isotype control antibody respectively, washed analyzed with FACS. APC signal was used to evaluate the non-specific binding activity to non-transduced PBMCs.
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