靶向NKG2家族，剑指肿瘤免疫领域

自然杀伤（NK）细胞最近处于许多免疫治疗策略的前沿，人们正在开发一些新的方法来充分利用NK细胞的抗肿瘤潜力。

自然杀伤细胞（NK细胞）表面表达多种激活性受体和抑制性受体，这些受体与相应的配体结合后，共同调控NK细胞的功能。这种调控机制使得NK细胞能够高效地识别和杀伤体内的异常细胞，如衰老细胞、肿瘤细胞和病毒感染细胞等，同时保护正常细胞免受攻击，对维护机体内环境的稳定起到重要作用。

NKG2受体家族是NK细胞表面的重要受体家族，包括NKG2A、NKG2B、NKG2C、NKG2D、NKG2E和NKG2F等成员。大多数成员与CD94蛋白通过二硫键结合形成异源二聚体复合物，但NKG2D和NKG2F不与CD94结合。这些受体具有抑制或激活NK细胞的作用。它们的氨基酸序列高度同源，特别是人类的NKG2A和NKG2C，它们的同源性达到90%。尽管NKG2C和NKG2E在胞外段的氨基酸序列与NKG2A非常相似，但它们在功能上完全相反，因此对于抗体的选择性要求很高。

NKG2A又称自然杀伤细胞凝集素样受体，是NKG2受体家族中抑制性的受体，主要表达在NK细胞表面和部分T细胞（CD8+T细胞、Th2细胞以及NKT细胞）。在人的免疫细胞表面，NKG2A与CD94结合形成异源二聚体复合物NKG2A-CD94, 被靶细胞上MHC-I类分子HLA-E识别，从而激活细胞内的抑制性信号通路，最终抑制NK细胞的活性。研究发现，多种肿瘤细胞高表达HLA-E, 与异二聚体复合物结合后可抑制NK的细胞毒活性和细胞因子分泌，使肿瘤细胞实现免疫逃逸。因此，NKG2A抗体可以阻断这一抑制信号，从而释放NK细胞，起到抗肿瘤的作用。

NKG2A–HLA-E免疫检查点机制（来源：文献）

2023年10月，范德比尔特大学医学中心的研究团队在Cancer discovery期刊上发表题为 NKG2A is a Therapeutic Vulnerability in Immunotherapy Resistant MHC-I Heterogeneous Triple Negative Breast Cancer 的研究论文，发现抗NKG2A与抗PD-L1疗法相结合可能是一种有希望且尚未被充分研究的方法来治疗三阴性乳腺癌。

该研究揭示了TNBC中MHC-I表达的异质性对免疫细胞浸润和治疗反应的影响。增加MHC-I异质性与NK细胞浸润增加相关，可能通过提高肿瘤内NK细胞浸润改变免疫环境。抑制NKG2A受体和抗PD-L1治疗联合应用可增强TNBC中异质性MHC-I表达模型的治疗反应和肿瘤缩小。研究强调了MHC-I表达和免疫细胞浸润对患者预后和寻找新的免疫治疗靶点的重要性。总之，该研究揭示了TNBC中MHC-I异质性与免疫浸润、治疗反应的关系，并提出了通过抑制NKG2A来增强免疫治疗效果的潜在策略。

在NK细胞杀伤异常细胞的过程中，激活性受体发挥了关键性作用，NKG2D是NK细胞激活最相关的受体之一，以同二聚体的形式表达在人的所有NK细胞上，NK细胞通过NKG2D受体与靶细胞上表达的NKG2D配体NKG2DL（MICA、MICB和ULBP1）相结合，NKG2DL在正常细胞中几乎不表达或较少表，在应激条件下如细胞变异、病毒感染等可诱导表达，触发NK细胞激活信号，从而杀伤靶细胞。

目前NKG2D主要有抗体和细胞疗法两个研究方向，抗体主要适应症是自身免疫性疾病如克罗恩病，细胞疗法主要包括CAR-T、CAR-NK等。

MICA是广泛表达于肿瘤中的NKG2D配体。开发靶向MICA的单克隆抗体，利用NK细胞介导的ADCC作用，是一种重要策略。此外，黑色素瘤患者接受Ipilimumab治疗时，可观察到自体产生的抗MICA抗体，这有助于清除血浆中的sMICA，并促进树突状细胞对肿瘤抗原的交叉呈递。

另一种靶向NKG2DL的方法是利用CAR-T或CAR-NK细胞。已经开发了一些通过工程设计表达NKG2DL的CAR-T细胞，它们在体外对细胞系和体内对人类异种移植或同基因小鼠的肿瘤细胞系具有增强的效应器功能。此外，通过将人类NKG2D胞外结构域与DAP12融合，表达CAR-NK细胞在体外对多种实体瘤细胞系表现出增强的NK细胞介导的细胞毒性，并且在体内显示出治疗效果。

NKG2D与不同配体相互作用（来源：文献）

NK细胞在肿瘤免疫治疗中具有重要地位，特别是在血液肿瘤方面已取得初步成功。然而，实体瘤的治疗仍面临挑战。靶向NKG2家族蛋白成为一种引人注目的策略。

为助力抗体药物开发，ACROBiosystems百普赛斯已成功开发一系列高质量NKG2家族蛋白产品，包括NKG2A、NKG2A &CD94异源二聚体、NKG2D、NKG2C等，可用于免疫、抗体筛选、种属交叉等应用场景。

✔ 二聚体结构经SEC-MALS验证；

✔ 多种属：产品覆盖Human，Mouse，Cynomolgus种属，可应用于种属交叉实验；

✔ 高纯度：SDS-PAGE验证纯度＞95%，MALS验证纯度＞90%；

✔ 高生物活性经ELISA验证。

◆ NKG2A&CD94异源二聚体结构经SEC-MALS验证

The purity of Human NKG2A&CD94, Mouse IgG2a Fc Tag (Cat. No. NC4-H5253) is more than 90% and the molecular weight of this protein is around 125-145 kDa verified by SEC-MALS.

◆ NKG2D高生物活性经配体结合验证

Immobilized Human NKG2D Protein, His Tag (Cat. No. NKD-H5245) at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Recombinant Human MICA Fc Chimera with a linear range of 0.2-4 ng/mL (QC tested).

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◆ NKG2A&CD94高生物活性经抗体结合验证

Immobilized Human NKG2A&CD94, Mouse IgG2a Fc Tag (Cat. No. NC4-H5253) at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Monoclonal Anti-NKG2A (Z270), Human IgG1 with a linear range of 0.2-8 ng/mL (QC tested).

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Immobilized Biotinylated Human NKG2A&CD94 Protein, Fc,Avitag (Cat. No. NC4-H82F5) at 1 μg/mL (100 μL/well) on streptavidin (Cat. No. STN-N5116) precoated (0.5 μg/well) plate can bind various dilution ratio of HLA-E*01:03 HLA-A leader3-11 Tetramer-VMAPRTLVL-PE (QC tested).

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