近年来, “Off-the-Shelf(即用型产品)”改造免疫细胞的概念,旨在制备一系列免疫排斥弱、高活性、大量的、即用的改造免疫细胞,用于解决传统自体免疫细胞疗法遇到的瓶颈,增加疗法的普适性、降低生产和使用成本。目前,科学家将具有分化潜能的干细胞如人诱导多能性干细胞iPSC这种诱导分化NK和T细胞的技术和免疫细胞疗法相结合,开发出了iPSC-CAR-NK和iPSC-CAR-T等疗法,极大地发展了免疫细胞疗法的可及性。
实际上,在此过程中,Notch信号通路对于T/NK等免疫细胞的发育十分重要,通过表达DLL1或DLL4的饲养层细胞,或使用DLL4-Fc包被板激活Notch等信号通路,对于T、NK等细胞的诱导具有关键作用,如有研究人员将T细胞来源的 iPSC诱导分化为HSPC后,使用DLL4、SCF、TPO、Flt3L、IL7等因子刺激HSPC,HSPC经过CD5+CD7+淋巴祖细胞阶段、CD4+CD8+的未成熟T细胞阶段,最终产生具有杀伤能力的CD4-CD8+成熟T细胞,以应用于后续iPSC-T等细胞疗法的开发。
为更好支持iPSC-T/NK细胞诱导分化,ACROBiosystems百普赛斯基于完善的GMP质量管理体系,自主开发出GMP级别重组DLL4蛋白,满足无饲养层细胞体系下的iPSC分化培养。
GMP级别重组DLL4蛋白支持HSPC分化为CD5+CD7+双阳性淋巴祖细胞
实验操作步骤
孔板包被:使用无菌水配制含有DLL4-Fc蛋白的包被液,向4℃预冷的组织培养处理的24孔细胞培养板中加入300 μL 包被液,轻拍板壁使包被液完全覆盖整孔,将孔板水平放置于4℃环境包被过夜。
培养基配制:在基础培养基中外加入ITS、50ng/mL SCF、100 ng/mL TPO、50ng/mL Flt3L、50 ng/mL IL-7等,混匀即为完全培养基。
细胞复苏:恢复包被孔板至室温,弃掉包被液,向每孔中立即加入2 mL完全培养基;复苏冻存的成体CD34+ CD45+细胞,重悬计数,取5000-20000个活细胞种入一个孔中,轻轻振荡孔板混匀细胞。将加入细胞的孔板放于37℃的二氧化碳细胞培养箱中培养以起始分化,记为分化第0天。
换液、换板:隔天换液 80%,定期更换新包被的24孔板。
检测:分化14天后,开始检测,使用PE标记的CD5抗体和APC标记的CD7抗体,通过流式细胞术,检测细胞群体中CD5+ CD7+的细胞比例。
验证结果
ACROBiosystems百普赛斯的DLL4-Fc可配合SCF、TPO、Flt3L、IL7等因子诱导CD34+CD45+ HSPC 产生CD5+CD7+双阳性的淋巴祖细胞,此细胞可在分化第2周进行检测,双阳性细胞比率在随后2周继续提升。
诱导14天结果
诱导25天结果
货号 |
产品描述 |
GMP Human DLL4 Protein, Fc Tag |
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GMP Biotinylated Human DLL4 Protein, His,Avitag™ |
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ActiveMax® Human DLL4 μBeads, premium grade (for cells) |
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GMP Human VCAM-1 Protein, Fc Tag |
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GMP Human SCF Protein |
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GMP Human Thrombopoietin Protein |
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GMP Human Flt-3 Ligand Protein |
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GMP Human IL-7 Protein |
参考文献
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