狂犬病又称恐水症,是由狂犬病病毒感染引起的一种动物源性传染病,发病后会出现恐水、畏光、怕风、恐惧不安等症状,病毒感染后病死率几乎100%。近年来,狂犬病报告死亡人数一直位居我国法定报告传染病前列,给人民群众生命安全和身体健康带来严重威胁。
狂犬病病毒属于单股负链病毒目(Mononegavirales)弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病病毒属(Lyssavirus)。2018年国际病毒分类委员会(ICTV)将16种狂犬病病毒属病毒划分为 3 个不同的遗传谱系(PhylogroupⅠ-Ⅲ)。我国目前主要流行Rabies virus(RABV),属于遗传谱系Ⅰ。
图片来源DOI: 10.1146/annurev-virology-100114-055157
狂犬病毒基因组包含5个高度保守的单顺反子基因,分别编码5个病毒蛋白:糖蛋白(G)、核蛋白(N)、基质蛋白(M)、非结构蛋白(NS)和RNA依赖的RNA聚合酶蛋白(L)。
病毒借助于G蛋白与目标细胞(肌细胞,邻近的感觉和运动神经元)上相应的受体(包括烟碱乙酰胆碱受体、神经细胞粘附分子CD56和低亲和力神经生长因子受体NTR75)作用,进入肌肉或其他局部组织中复制,然后通过运动终板和运动轴突到达中枢神经系统,并通过快速的轴突逆行运输向中枢神经系统传播。 狂犬病毒在中枢神经系统中增殖后,沿神经通路离心传播到外周,特别是通过副交感神经系统,感染唾液腺和皮肤等器官。
糖蛋白的正确构象对于指导改进疫苗的设计和确定治疗靶点极为重要。人类抗体会识别病毒蛋白质上的单一位点,当这个位点被隐藏或移动时,抗体就无法进行识别。以狂犬病毒为例,大多狂犬病疫苗是由灭活病毒制成,在病毒灭活的过程中会导致G蛋白发生变形,疫苗无法向免疫系统显示病毒的“全面貌”,从而导致疫苗接种后免疫反应效果不佳,因此进一步研究并优化狂犬疫苗十分重要。
RABV核蛋白N与基因组RNA结合,能保护病毒RNA免遭核酸酶破坏。N蛋白的磷酸化能调节病毒的转录和复制。核蛋白N刺激机体后不能产生保护性抗体,但能参与特异抗原识别和免疫记忆。
狂犬病毒糖蛋白G是病毒表面唯一暴露的蛋白,也是疫苗引发的中和抗体的靶标。狂犬病毒G蛋白在结构上是异质的,狂犬病病毒糖蛋白的序列能在需要时展开并向上翻转,它可以在与宿主细胞融合前和融合后的过程中转换形态,从三聚体结构变为单体结构。美国拉霍亚免疫学研究所和法国巴斯德研究所领导的研究团队的捕获到狂犬病病毒糖蛋白G三聚体与“预融合”特异性中和抗体结合的高分辨率三维结构,证实了糖蛋白三聚体界面涉及中心α螺旋和相邻环之间的相互作用以及融合环在三聚体化和融合前构象稳定中的作用,为开发更有效的疫苗提供了设计途径。
为助力狂犬病毒疫苗研发,ACROBiosystems百普赛斯推出狂犬病毒疫苗研发整体解决方案。
✎ 狂犬病毒天然三聚体结构G蛋白(货号:RAG-V55H5)
高纯度经SEC-MALS验证
经SEC-MALS.SEC-MALS验证该蛋白(Cat. No. RAG-V55H5) 的相对分子质量在165 ~ 195 kDa。
高活性经ELISA验证
经ELISA验证,Rabies virus G蛋白(Cat. No. RAG-V55H5)可以与其抗体(Cat. No. RAG-M305)结合,线性范围约为0.1-2 ng/mL。
✎ 狂犬病毒G蛋白ELISA抗原检测试剂盒(货号:RAS-A167)
高精密度
为评估RAS-A167的精密度,对3个已知浓度的样本酶标板内重复测试20次,以评估酶标板内的精密度;对3个已知浓度的样本酶标板间重复测试3次,以评估酶标板间的精密度。经验证该项目的板内及板间精密度CV≤9%,优于试剂盒申明的标准范围(CV≤15%)。
稀释线性优于标准
为评估RAS-A167的稀释线性,对高值的加标样本梯度稀释后进行分析。结果显示,所有分析样本的平均回收率在80%-120%之间,优于接受范围。
基质效应符合标准
为评估RAS-A167的基质效应,分别测试了不同比例的培养基对标准品干扰,结果显示,10%的1640培养基及10%的DMEM培养基对标准品检测的干扰,RSD均符合标准(RSD<15%)。如使用100%培养基,建议MRD=10。
✎ 狂犬病毒G蛋白ELISA抗体检测试剂盒(货号:RAS-T157)
高精密度
为评估RAS-T157的精密度,对7个已知浓度的样本酶标板内重复测试10次,以评估酶标板内的精密度;对7个已知浓度的样本酶标板间重复测试3次,以评估酶标板间的精密度。经验证该项目的板内及板间精密度CV≤10%,优于试剂盒申明的标准范围(CV≤15%)。
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