【resDetect™】聚焦复杂基质影响——CHO表达抗体纯化工艺中的HCD检测

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CHO细胞（Chinese Hamster Ovary cells, CHO）是广泛应用于生物制药工业中的一种常用细胞系。由于CHO细胞易于培养、高产量和稳定性好等优点，使其成为生产重组蛋白和生物药物的理想选择。然而，CHO细胞具有自身的基因组，在生产过程中释放出一些DNA片段会残留在最终的生物制品中（抗体药、疫苗、细胞因子等）。这些CHO宿主细胞DNA（Host cell DNA，HCD）可能对产品的质量和安全性产生影响，因此，在抗体药物的纯化工艺环节中，HCD的残留量是关键质量指标，但其检测往往面临抗体纯化工艺过程中复杂基质的巨大挑战。

CHO表达抗体工艺主要流程是在CHO细胞中表达目标抗体，然后通过细胞培养和收获阶段收集细胞培养上清液等。其中，纯化过程是从CHO细胞培养上清液中提取目标抗体的关键步骤之一，通常，首先采用亲和填料层析（AF），利用抗体与特定配体（主要是Protein A）之间的特异性结合来分离目标抗体，可有效地捕获抗体蛋白产物(回收率为95-99%)，同时去除绝大多数宿主细胞杂质(宿主细胞蛋白质和核酸)。蛋白A的洗脱通常在低pH（一般情况pH为3.8）下进行，随后在低pH下进行病毒失活（VI）。接着，进行阳离子交换层析（CEX）降低抗体聚集水平，阴离子交换层析（AEX）进一步除去残留宿主细胞蛋白和DNA等杂质。通过一系列尺寸排阻法，过滤去除包膜和非包膜病毒。这些步骤过程中使用的缓冲液，一般为磷酸盐、Tris-HCl、醋酸盐和柠檬酸盐等缓冲液，会根据抗体的特性和目标纯度的要求进行调整。最终，经过浓缩和稳定处理，可获得高纯度、高质量的CHO表达抗体产品，适用于各种应用领域，如生物医药研究和临床治疗。（流程见下图）。

采用蛋白A亲和层析法的纯化工艺抗体流程图

在纯化工艺开发过程中，这些中间品和原液需要进行HCD检测，并根据HCD残留量来调整工艺。然而，中间品的低pH和高pH缓冲液和纯化原液的高蛋白含量等复杂基质都会影响HCD检测。

为支持抗体治疗药物的相关研发，ACROBiosystems百普赛斯基于抗体纯化过程中HCD检测的真实场景，针对各种复杂基质开发设计了适用性强的resDetect™ CHO resDNA定量检测试剂盒（货号：OPA-R004），配套使用resDNA样本前处理试剂盒（货号：OPA-R005），能够专一快速的对中间品或原液成品中resDNA进行准确定量。

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针对高蛋白基质（高达150 mg/mL）与不同pH基质（3.0≤pH≤10.0）的模拟样本，使用resDetect^TM试剂盒进行HCD的提取和检测。可接受加标回收率应为50-150%。结果显示，加标回收率都在98-122%之间，具体结果见下表。

针对CHO抗体纯化工艺开发中不同中间品真实样本（AF、VI、AEX和DF），利用resDetect™试剂盒进行HCD的提取和检测。可接受加标回收率应为50-150%。结果显示，不同中间品样本的加标回收率都接近100%。