根据T辅助淋巴细胞(Th 细胞)分泌的细胞因子谱(cytokine profiles)的不同，可将T helper（后简称Th） 细胞分为Th1，Th2等亚群。在人的正常生理状态下，Th细胞几乎不分化为Th1、Th2；当受到刺激素、病原体等特异抗原的刺激时，分化能力大大增强。Th1 和 Th2 细胞在机体免疫和疾病发生中起截然不同的作用。Th1 细胞主要刺激和介导细胞免疫、细胞毒性T细胞(CTL)、巨噬细胞活化以及迟发性超敏反应(DTH)。Th2 细胞主要介导体液免疫，其分泌的 IL-4 能促进B细胞的增殖、分化并诱导产生抗体。正常情况下，机体中Th1和Th2处于相对平衡的状态，当平衡被破坏时，即为“Th1/Th2平衡飘移”，可能会引起多种疾病，如肿瘤、自身免疫性疾病及变态反应等。通过研究Th1/Th2细胞分泌的细胞因子，明确平衡漂移状态，选择性的调节Th1或Th2细胞水平以恢复平衡，可达到治疗疾病的目的。
除药理方面针对细胞因子检测外，我国已有相关法规明确指出免疫调节类药物要严控细胞因子释放综合征发生的风险。2021年，CDE发布的《药物免疫原性研究技术指导原则》：对于免疫调节类药物，除了在常规的动物体内毒性试验中进行细胞因子相关检测外，还应进行体外细胞因子释放试验。细胞因子的检测项目应 与受试药物临床安全性考虑密切相关，一般情况下，观察指标包括但不限于 IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ 和 TNF-α。
综上，检测Th1/Th2细胞分泌的细胞因子非常必要。众所周知，正常血清、细胞培养上清中的细胞因子含量低，不容易检测，加上样本量少，传统的ELISA方法无法满足多种因子同时检测需求。随着流式细胞术和固相化技术的普及和基于微球的多指标检测技术的革命式发展，采用流式细胞术同样可以对可溶性蛋白质进行定性和定量分析。
基于流式细胞术的Multiplex Bead Assay
ACROBiosystems百普赛斯ClinMax™推出基于流式细胞术的Multiplex Bead Assay试剂盒。
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抗体对选择：通过使用标准蛋白信噪比筛选自研抗体对以满足试剂盒性能，在获得检测灵敏度符合要求抗体后，对细胞上清、血清、血浆等样本检测确定抗体对真实样本特异性识别；
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捕获磁珠：主要采用磁性微球作为分群载体，利用化学反应实现抗体与磁性微球共价键偶联，偶联后通过与标准批次比对确认抗体偶联量及批次一致性；
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检测抗体：通过PE直接标记，降低生物素与亲和素反应可能带来的非特异信号；
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缓冲体系：采用磷酸盐缓冲体系，通过调节detergent浓度调节满足试剂盒样本中常见干扰物质如EDTA、血红蛋白等对检测干扰性。为降低试剂毒性采用proclin代替叠氮钠作为抗菌剂。
ClinMax™ Human Th1/Th2 Cytokine Kit
· Flow Cytometry Multiplex Bead Assay·
ACROBiosystems百普赛斯经过严格的方法学验证，自主研发出基于流式多因子联合检测技术平台（Flow Cytometry Multiplex Bead Assay）的Th1/Th2细胞因子联合检测试剂盒（货号：FCM-C05R），它能够一次性对细胞培养基、血清中的IL－2、IL－4、IL－6、IL－10、TNF-α、IFN－γ、进行定量检测，大大提高了科研人员的工作效率以及实现对稀少珍贵样品的多指标分析。
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样本少：检测样本用量低，仅需10μL样本；
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时间短：检测时间短，仅需3h即可测出6种细胞因子含量，支持一个工作日内重复
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步骤少：使用磁吸附，简单易行，减少离心操作，避免磁珠丢失
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检测范围宽: - 10000-9.8pg/mL；
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兼容强：对流式细胞仪适应性强，可与不同商家品牌流式细胞仪和多种分析软件配套使用；
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验证全：完整方法学验证，严格控制产品灵敏度、批间/批内差精密度、准确度、稀释线性、抗干扰性、特异性等；
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基于自主蛋白、抗体等原料开发，产品性能和供货能力保障。
A representative scatter plot showing single bead population in P1 gate (left), the beads conjugated with analyte-sepcific antibody differntiated by APC fluorescence intensity (middle), and fluorescence signal in propotion to concentration of the analyte was measured for each cytokine in PE channel (right). Data was generated on Beckman Cytoflex S Flow Cytometer, equipped with blue laser (488 nm) and red laser (640 nm).
A double logarithmic fitting curve was plotted for each cytokine (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ). The present curve of each cytokines was ranging from 9.8 pg/ml to 10000 pg/ml respectively.
The CV of 5 cell culture results with different 3 batches are lower than 20%.（The IL-6 concentrations of cell culture sample II、III are lower than LOQ）
The CV of 5 cell culture results performed in different days are lower than 20%, which means different time have the same results.
The recovery with 3 different concentrations（2500 pg/ml 、 625 pg/ml 、156.25 pg/ml） spiked into serum, plasma and cell culture are about 80%~120%.
Serum, plasma and cell culture were diluted 1:2, 1:4 and 1:8 with Assay Buffer, the ratio of detection and mean value are 80%~120%.
Bilirubin, cholesterol, sodium citrate, hemoglobin, heparin sodium which the concentrations with higher than physiological and working level, were spiked into 3 different concentrations standard, the recoveries are 80-120%, which means there were no effect to the detection.
When one factor spiked into, the PE signals of other factors are negative.
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