【特色新品】通用型CAR阳性率检测工具——兔抗G4S Linker抗体

随着基因工程技术在肿瘤治疗应用中的快速发展，以CAR-T为代表的免疫细胞疗法已在白血病、淋巴瘤等血液肿瘤患者治疗中展现出显著的临床效果。除了CAR-T以外，CAR-NK、CAR-Treg、CAR γδ-T等围绕“CAR”的细胞疗法呈现蓬勃发展。实际上，“CAR”是一种嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor)，利用基因转移技术将构建的CAR受体转导到免疫效应细胞中，以识别肿瘤相关抗原。该受体包含四个主要组分：胞外靶抗原结合结构域（单链可变片段scFv）、铰链区域、跨膜结构域以及胞内信号转导域，这些组成元件赋予了免疫细胞对特定抗原的识别能力，以更好的发挥肿瘤杀伤作用。

“CAR”是影响CAR细胞疗法有效性的关键，法规文件明确要求CAR表达阳性率检测是药物质控的重要指标之一。CAR检测几乎贯穿CAR细胞药物的整个开发周期：如早期研发CAR的表达确认、CMC质控阶段CAR细胞阳性率质控、临床阶段CAR药物的PK研究等，因此，选择合适的CAR表达检测试剂对于药物的成功开发至关重要。目前，市面上已有多种CAR检测试剂/工具，它们大多数是基于CAR的不同结构区域而设计开发，有针对CAR抗原结合位点的，比如抗原蛋白和抗独特型抗体；或针对通用domain的，比如结合κ轻链Protein L蛋白，结合Fab的抗Fab抗体，针对CAR Linker的抗CAR Linker 抗体等。整体来看，这些CAR阳性率检测试剂均有各自的优劣势，可根据实际应用需求来选择。

CAR的scFv是由一个灵活的Linker连接可变重链（variable heavy, VH）和可变轻（variable heavy, VL）而成，目前靶向肿瘤抗原的CAR使用最为广泛的是一种柔性氨基酸链——聚甘氨酸-丝氨酸(G4S)，序列为(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n，可通过重复次数“n”，来优化G4S氨基酸链的长度，以实现scFv或蛋白功能域的适当分隔，或维持必要的区域间相互作用。目前，多种CAR的构建体分别利用了(Gly4Ser)3或(Gly4Ser)4氨基酸链，这也是普遍认为的最佳氨基酸链长度：15-20个氨基酸的范围。基于此，可利用抗G4S Linker抗体特异识别(G4S)n柔性Linker，与细胞表面表达的不同CAR发生特异性结合，从而达到对多种CAR检测的目的。

ACROBiosystems百普赛斯全新推出通用型CAR检测工具——PE荧光标记兔抗G4S Linker抗体（货号：G4S-PFMY25），经FACS流式验证，可高特异、高灵敏结合G4S Linker CAR细胞，具有高普适性，全面助力细胞疗法药物的开发进程。

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经流式验证，PE荧光标记兔抗G4S Linker抗体可高特异与Anti-CD19 (G4S)4、Anti-MSLN (G4S)3、Anti-CD22 (G4S)3等类CAR细胞结合。

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Non-specificity of PE-Labeled Monoclonal Anti-G4S linker Antibody, Rabbit IgG (016) (Cat. No. G4S-PFMY25) binding to CD3+ cells present in human PBMC. 5e5 of human PBMCs were simultaneously stained with FITC-labeled anti-CD3 antibody and PE-Labeled Monoclonal Anti-G4S linker Antibody (2 μL of the antibody stock solution corresponds to labeling of 5e5 cells in a final volume of 100 µL) and washed and then analyzed with FACS. Both FITC and PE positive signals was used to evaluate the non-specific binding activity to human CD3+ cells (QC tested).

Flow cytometric analysis of Anti-CD19 CAR-293 cells staining with PE-Labeled Monoclonal Anti-G4S linker Antibodies. PE signal was used to evaluate the binding activity of anti-G4S linker antibody. The biological activity level of ACRO is superior to competitor C (Routinely tested).

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