【ComboX应用解读篇】链霉亲和素：免疫分析“好拍档”

在生物医药领域，对与疾病和细胞过程相关的关键生物分子进行精准定性和定量分析，对于疾病的早期诊断和治疗预后至关重要。然而，许多功能上必需的生物分子，如激素、酶、细胞因子和生长因子，通常以低浓度存在于生物体液和组织中，为传统分析检测和量化方法带来挑战。因此，需要采用专门的捕捉与获取技术，利用抗原和抗体之间的特异性结合来选择性检测和量化目标分析物和生物分子。

免疫分析示例

生物素（Biotin）是许多羧基转移酶的辅基，参与其催化反应，广泛存在于原核生物和真核生物中。链霉亲和素（Streptavidin，SA）是一种由链霉菌产生的蛋白质，它能与生物素形成高亲和力的非共价复合物，结合过程几乎不可逆，这种结合力在自然界中堪称最强之一。

SA-Biotin体系

SA具有高度特异性，几乎不与其他分子发生相互作用，同时SA在广泛的pH值和温度范围内都能保持稳定。使SA成为一种极具价值的生物分子捕获与富集工具，在ELISA、蛋白质检测和细胞分选等分析应用中发挥关键作用。基于SA-Biotin的强烈相互作用，可以在免疫分析中捕获更多的分析物以提高ELISA的检测灵敏度。

ELISA中的不同信号放大模式

SA还可以通过与酶、荧光染料等多种分子进行标记或偶联，形成多种复合物以放大免疫反应检测信号。

辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP）是免疫分析中常见且广泛使用的酶标记物选择。与传统的酶标记检测相比，可以实现更高的检测灵敏度，但通常只能提高2-10倍。

Li等人的研究发现，将SA-HRP作为信号扩增的标签，与基于HRP的传统ELISA相比，采用SA-HRP标记的竞争性ELISA法，其校准曲线的线性工作范围提高了2.4倍，从而提高了黄曲霉毒素B1的检测灵敏度。

HRP和SA-HRP在ELISA小分子检测中的性能对比

虽然经典的 ALP 连接光学免疫测定简单有效，但它们固有的灵敏度低且容易受到背景干扰。Huang等人提出了一种基于ALP滚环扩增（SA-ALP）的RNA检测方法，该方法在灵敏度和特异性上可与基于荧光原位杂交（FISH）和RNAscope技术相媲美，并且操作更加简便，能有效克服背景干扰。这种SA-ALP RNA检测方法为RNA分析提供了新的选择。

ALP滚环扩增原位显色可视化具有双链能力的单个RNA分子

使用荧光染料如异硫氰酸荧光素（FITC）标记抗体或抗原，当加入激发光时，荧光标记物会发出可检测的荧光信号。但存在背景干扰、光漂白、探针选择限制及生物学影响等局限性，降低了灵敏度和准确性，限制了持续监测能力。为了克服这些局限性，Zhang等采用SA-FITC标记抗体（Ab2）的方法建立了一种定量检测肿瘤标志物甲胎蛋白（AFP）的荧光探针。该方法的线性范围为5～200 ng/mL，检测限低至2.44 ng/mL，不仅适用于人血清样本的分析，还成功应用于临床肝病患者样本的筛查。

夹心免疫分析方法定量测定AFP

SA偶联吖啶酯（Acridinium ester）可充分发挥化学发光的高灵敏度优势，同时得益于SA-Biotin结合的稳定性和通用性，已成为化学发光检测中的理想标记技术。关键在于，Biotin和SA以4:1比例结合，因此吖啶酯-生物素-靶标复合物也以4倍比例与SA结合，大幅提高了检测灵敏度。

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