PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cell,外周血单个核细胞)是从外周血中分离出的一个免疫细胞群,这些免疫细胞广泛参与免疫应答,负责识别和清除外来病原体及异常细胞,维护机体健康。在PBMC中,淋巴细胞约占PBMC总细胞数的70%到90%。根据淋巴细胞的发生来源、形态结构、表面标志物及免疫功能不同,淋巴细胞可分为T细胞(CD3+)、B细胞(CD3-CD19+)和NK细胞(CD3-CD16+CD56+)等细胞群,根据CD4和CD8的表达不同,T细胞又分为2个亚群:辅助性T细胞(CD3+CD4+)和杀伤性T细胞(CD3+CD8+)。作为研究热点,PBMC在临床与科研中占据了举足轻重的地位,PBMC不仅是CAR-T等细胞治疗技术中的主要细胞来源,还在体外标志物检测、肿瘤免疫学、毒理学及罕见病研究等多个领域发挥着不可替代的作用。
以CAR-T细胞治疗为例,CAR-T细胞治疗通常涉及三个关键阶段:细胞来源的评估、细胞产品的制备和最终治疗效果的评估。PBMC作为CAR-T细胞的主要细胞来源,了解PBMC中不同细胞及其亚群的比例对于细胞治疗工艺的指导、细胞纯度的评估以及体内药效的评估至关重要。PBMC或终产品中不同细胞及亚群比例是影响CAR-T细胞治疗安全性和有效性的关键考量之一。多个权威机构和指南,如中国食品药品检定研究院、国家药品监督管理局药品审评中心以及FDA,均指出必须对不同供体来源的PBMC进行详细的细胞表型分析,包括CD3+、CD4+、CD8+T细胞和NK细胞等的百分比检测。CAR-T细胞产品的质量控制标准涉及鉴别、均一性和纯度检测,通过检测不同细胞表面标志物,确保产品的一致性和质量。
用于评估免疫细胞群的技术有流式细胞术(flow cytometry)、下一代测序、qPCR测定和基于芯片的测定等,这些技术均是基于免疫细胞表面表达不同的细胞表面标志物进行的。除流式细胞术外,其他方法通常面临通量较低、耗时且昂贵的局限。因此,流式细胞术已成为鉴定和分选复杂群体中的细胞的首选方法,尤其是在分析血液样本中的免疫细胞亚群时尤为重要。流式细胞术通过抗体特异性结合细胞表面标志物来识别细胞,并利用抗体染色策略实现每种抗体与不同荧光染料的偶联,从而识别和量化特定的免疫细胞群体及其亚群。该技术具有高效、精准和高灵敏度的优点,被广泛应用于基础研究和临床样本分析中。
ACROBiosystems百普赛斯ClinMaxTM基于流式细胞术平台,经严格方法学验证,自主研发出即用型Human TBNK 6-color Cocktail Flow Panel(Cat. NO. ICA-A001),可以一次性快速可靠地检测出人全血或PBMC中的T细胞、B细胞和NK细胞群,让您免于配色、多次加样和抗体滴度验证的烦恼,为您的药物开发、免疫监测等研究提供高质量、高效率的免疫细胞分型分析工具!
操作时间短:使用混合抗体组合一步染色,实验流程仅需15 min;
操作简便:仅需将试剂与细胞混合孵育即可通过流式细胞仪完成检测;
兼容性强:仅需要包含蓝色及红色两种激光器且有可接收六色荧光信号检测通道的流式细胞仪即可;
通量高:可一次性检测50个样本;
高特异性:Isotype Control、FMO control及mock细胞对照验证均无非特异性结合;
最优抗体组合和浓度:试剂盒包含最佳抗体和染料组合,大大提升多色荧光实验的灵敏度;
可靠的数据验证:经过PBMC真实样本验证;
成本可控:基于自主抗体原料和荧光素偶联工艺开发,产品性能和供货能力有保障。
检测流程示意图
产品组分
推荐分析逻辑
经流式验证的产品性能
TBNK cells gating logical and PBMC cell analysis: Set the CD45/SSC scatter plot to identify the CD45+ lymphocyte cell population (A). CD45+ as lymphocyte cell population, select the CD45+ gate, set the CD3/SSC scatter plot to identify the CD3+ T cell population (B). The CD3/CD4 scatter diagram the Th gate to identify the CD3+CD4+ helper T cell population (C). The CD3/CD8 scatter diagram Tc gate to identify the CD3+CD8+ toxic T cell population (D). The CD3/CD19 scatter diagram B gate to identify the CD3-CD19+ B cell population (E). At last the CD3/CD16+CD56 scatter plot was set to access the CD3-CD56+CD16+ NK cell population (F).
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