siRNA药物开发——针对慢性代谢类疾病的靶点蛋白检测

目前，小核酸类药物市场发展迅速，全球大约有2313个小核酸类药物管线，主要包括ASO、siRNA、miRNA等其他小核酸药物。由于大部分ASO药物需要频繁给药而导致潜在风险，siRNA药物成为小核酸药物的主流趋势，大约siRNA药物有900+。

siRNA药物的适应症&靶点，主要包括：代谢类（PCSK9、TTR、APOC3、17β-HSD13、Lp(a)、PNPLA3、INHBE）；免疫（C3、C5）、感染（HBsAg、HBV RNA）、癌症（PDL1、AR、KRAS、KRAS G12D）等。其中，慢性代谢类靶点药物增长最快，例如INCLISIRAN (商品名：Leqvio)作为一款first-in-class靶向PCSK9的siRNA药物，每年只需两次皮下给药，该药物是全球首款也是目前唯一一款PCSK9 siRNA降血脂药物。

siRNA药物作用机制主要包括：

图1. siRNA作用机制示意图

目前，siRNA药物递送系统主要有三类：

其中siRNA-GaINAc与siRNA-LNP/LPP/PNP是siRNA药物开发递送的主流。其中，siRNA-LNP/LPP/PNP极易引起身体补体系统激活，引起比较严重的免疫反应。

图2. siRNA药物主流递送系统

以PCSK9为靶点的药物INCLISIRAN在FDA上公布的Clinical Pharmacology and Biopharmaceutics Review中文件，它们基于临床药理学总结提交了药效学研究的结果以支持生物制品许可申请（BLA）（图3），这些临床试验中，研究人员通过选择对血清中PCSK9的表达水平进行监控从而来评估其药效。

图3. Summary of Clinical Pharmacodynamics

除此之外，在siRNA药物早期开发和CMC阶段，代谢类靶点蛋白的检测也能用于评价siRNA药物的效价评价。为了加速siRNA药物研发，ACRO百普赛斯提供PCSK9、ANGPLT3、Insulin、Lipocalin-2/NGAL等代谢相关指标的定量分析ELISA试剂盒。试剂盒性能经过真实血液样本充分验证，保证分析结果的精确性、特异性、准确度、灵敏度和一致性。

线性范围

ClinMax™人ANGPTL3 ELISA检测试剂盒的线性检测范围为0.156 ng/mL – 10 ng/mL。具体数据见图4。

图4. (a). CEA-B089试剂盒标准品线性检测数据(OD450nm-630nm); (b). CEA-B089试剂盒标准品四参数方程拟合线性图

批内、批间精密度

按本产品（CEA-B089）操作说明，测定3个浓度的质控品，每个质控品重复检测10次，计算10次测量结果的平均值（M）、标准差（SD）和变异系数（CV）。结果显示，测定质控品的CV都低于10%，具体结果见图5。

按本产品（CEA-B089）操作说明，测定3个批次3个浓度的QC（pg/mL），每个质控品重复检测3次，计算9次测量结果的平均值（M）、标准差（SD）和变异系数（CV）。结果显示，测定质控品的CV都低于15%，具体结果见图5。

图5. (a). CEA-B089批内精密度数据图；(b). CEA-B089批间精密度数据图及CV值

回收率

将本产品（CEA-B089）中的参考品，用样本稀释液分别配置成高值血清样本，按照1：19的体积比例加标到血清样本中。按照试剂盒说明书，每个样本均检测2次，求出检测结果的浓度值的平均值。回收率的计算公式=（加标样本值-Blank样本值*0.9）/理论值×100%。本产品回收率都在85-115%的范围内（见下表1）。

表1. CEA-B089回收率数据

稀释线性

将本产品（CEA-B089）中ANGPTL3参考品，用血清样本配置成为高值血清/血浆/细胞上清样本，用样本稀释液依次按1：1进行稀释，每个稀释浓度均检测2次，求检测结果的浓度值的平均值，结果显示，血清/血浆/细胞上清样本各稀释点的检测浓度应都在该待测物浓度标示值的±20%范围内，线性相关系数R²应大于0.95。回收率均在80%-120%范围内(见图6)。

图6. CEA-B089稀释线性曲线图

线性范围

ClinMax™人PCSK9 ELISA检测试剂盒的线性检测范围为0.625 ng/mL – 20ng/mL。具体数据见图7。

图7. (a). CEA-C202试剂盒标准品线性检测数据(OD450nm-630nm); (b). CEA-C202试剂盒标准品四参数方程拟合线性图

批内、批间精密度

按本产品（CEA-C202）操作说明，测定3个浓度的质控品，每个质控品重复检测10次，计算10次测量结果的平均值（M）、标准差（SD）和变异系数（CV）。结果显示，测定质控品的CV都低于10%，具体结果见图8。

按本产品（CEA-C202）操作说明，测定3个批次3个浓度的QC（pg/mL），每个质控品重复检测3次，计算9次测量结果的平均值（M）、标准差（SD）和变异系数（CV）。结果显示，测定质控品的CV都低于15%，具体结果见图8。

图8. (a). CEA-C202批内精密度数据图；(b). CEA-C202批间精密度数据图及CV值

回收率

将本产品（CEA-C202）中的参考品，用样本稀释液分别配置成高值血清样本，按照1：19的体积比例加标到血清样本中。按照试剂盒说明书，每个样本均检测2次，求出检测结果的浓度值的平均值。回收率的计算公式=（加标样本值-Blank样本值*0.9）/理论值×100%, 本产品回收率都在85-110%的范围内（见下表2）。

表2. CEA-C202回收率数据

稀释线性

将本产品（CEA-C202）中PCSK9参考品，用血清样本配置成为高值血清/血浆/细胞上清样本，用样本稀释液依次按1：1进行稀释，每个稀释浓度均检测2次，求检测结果的浓度值的平均值，结果显示，血清/血浆/细胞上清样本各稀释点的检测浓度应都在该待测物浓度标示值的±20%范围内，线性相关系数R²应大于0.95。回收率均在80%-120%范围内(见图9)。

图9. CEA-C202稀释线性曲线图

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