背景
脱氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）是一类可以将聚核苷酸链的磷酸二酯键切断从而降解DNA和RNA分子的水解酶。它们广泛存在于所环境、物料和耗材表面，在生物制品生产过程中使用核酸酶后同样有很大可能造成核酸酶的残留，对DNA及RNA相关研究造成困扰。此外，在生物制品的生产过程中，DNase和RNase作为杂质若跟随生物制品进入体内极有可能引发高强度的免疫原性并连带引发DNA/RNA的降解。因此，在生物制品及药物研发与生产过程中，对实验环境、物料以及产品中残留的核酸酶进行检测非常必要。
目前，核酸水解凝胶电泳法和紫外分光光度计法常被用于检测DNase和RNase的残留。然而核酸水解凝胶电泳法受实验人员的主观判断影响较大，无法准确定量，且操作时间长，测定通量较低。核酸水解紫外分光光度法定量限仅为0.01U/μL，不适合微量核酸酶残留的活性检测。HPLC法和电化学法则受限于仪器设备。相比之下，荧光探针法灵敏度高、检测速度速度快且能实现核酸酶活性的定量检测，因此被认为是核酸酶残留活性检测的最佳选择之一。
ACROBiosystems 百普赛斯经过严格的方法学验证，自主研发基于荧光探针法的DNase及RNase残留检测试剂盒，可用于判断环境、耗材、原料等是否存在DNase和RNase污染，检测检测生物制品中的DNase和RNase残留量，从而制定相应的清除方案以满足研发与生产的需求。
检测原理
基于荧光探针法的DNase及RNase残留活性检测有赖于荧光团标记的RNA和DNA底物。当样品中不含RNase和DNase活性时，底物稳定，荧光基团和淬灭基团距离较近，由于荧光共振能量转移原理，不产生荧光信号；当样品含有RNase和DNase活性时，底物降解，荧光基团和淬灭基团相互远离，从而产生逐渐增强的荧光信号；荧光信号的增加速率与酶的数量和活性呈正相关。通过使用荧光微板读取器在ex/em=490/520nm(RNase), 535/565(DNase)的波长下测量可以确定样品是否有DNase/RNase污染。
产品优势
基于酶活性原理设计，适用于多种RNase或DNase的残留检测；
严格质控，灵敏度、批间/批内差、准确度、冻融稳定性等保障；
可联合使用，同时检测RNase或DNase残留无干扰。
灵敏度高，最低检出限低至3.9*10-5U（DNase）/0.03pg（RNase）；
使用简单快捷，30min内即可完成80+样本检测；
DNase Activity Assay Kit (Fluorescence)（Cat. No.
ASE-A002）
判定标准
酶标仪法：待测品与阴性对照品的荧光比值＜2，则判定为无DNase残留，否则有残留。
适用范围
经验证，本试剂盒可用于检测生物制品、试剂、实验环境和耗材中DNase I、Benzonase™, Exonuclease III, mung bean nuclease, micrococcal nuclease,Bal31 nuclease, S1 nuclease, and T7 endonuclease污染及残留情况.
产品性能
> 灵敏度高：从30min的检测信号分析，检测灵敏度可达到3.90625*10-5U
> 时效性高：30min即可完成检测，标准曲线拟合R2>0.99，能够根据标准曲线计算出待测样本的DNase浓度
> 精密度高：批内差≤10%，批间差≤15%
Intra-Assay Statistics：
| Sample |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
| Number of Replicate |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
| Mean RFU |
2703 |
4170 |
6804 |
11847 |
19904 |
32163 |
45024 |
| Standard Deviation |
30 |
87 |
182 |
340 |
538 |
455 |
713 |
| Coefficient of Variation (%) |
1.1 |
2.1 |
2.7 |
2.9 |
2.7 |
1.4 |
1.6 |
Inter-Assay Statistics：
| Sample |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
| Number of Replicate |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
| Mean RFU |
2987 |
4711 |
8021 |
13914 |
23835 |
37728 |
51370 |
| Standard Deviation |
291 |
504 |
1025 |
1879 |
3323 |
5016 |
6482 |
| Coefficient of Variation (%) |
9.8 |
10.7 |
12.8 |
13.5 |
13.9 |
13.3 |
12.6 |
> 回收率高：在80%~120%范围以内
|
System |
55 µg/mL of Pyrophosphatase
(n=2) |
20 µg/mL Thermostable Inorganic Pyrophosphatase (n=2) |
10% of (50mM Tris-HCl and 50% Glycerol) (n=2) |
1×Reaction Buffer (n=2) |
| Sample |
Conc. (U) |
Calculated Conc. (U) |
Ave % RE |
Calculated Conc. (U) |
Ave % RE |
Calculated Conc. (U) |
Ave % RE |
Calculated Conc. (U) |
Ave % RE |
| Sample 1 |
0.002 |
0.002132 |
107 |
0.00201 |
100 |
0.002013 |
101 |
0.002183 |
109 |
| Sample 2 |
0.0005 |
0.000534 |
107 |
0.000491 |
98 |
0.000502 |
100 |
0.000565 |
113 |
| Sample 3 |
0.0001 |
0.000110 |
110 |
0.000101 |
101 |
0.000105 |
105 |
0.000118 |
118 |
> 稳定性好：探针反复冻融3次，测试性能仍符合要求，灵敏度无降低，CV<10%
RNase Activity Assay Kit (Fluorescence)（Cat. No.
ASE-A001）
判定标准
酶标仪法：待测品与阴性对照品的荧光比值＜2，则判定为无RNase残留，否则有残留。
适用范围
经验证，本试剂盒可可用于检测生物制品、试剂、实验环境和耗材中RNase T1, RNase 1 and micrococcal nuclease, Benzonase nuclease, mung bean nuclease, and S1 nuclease的残留及污染情况.
产品性能
> 灵敏度高：从30min的检测信号分析，检测灵敏度可达到0.03125pg
> 时效性高：30min即可完成检测，标准曲线拟合R2>0.99，能够根据标准曲线计算出待测样本的RNase浓度
> 精密度高：批内差≤10%，批间差≤15%
Intra-Assay Statistics：
| Sample |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
| Number of Replicate |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
| Mean RFU |
3506 |
5964 |
9831 |
16862 |
27758 |
41779 |
56643 |
| Standard Deviation |
130 |
192 |
291 |
532 |
180 |
783 |
412 |
| Coefficient of Variation (%) |
3.7 |
3.4 |
3.0 |
3.2 |
0.6 |
1.9 |
0.7 |
Inter-Assay Statistics：
| Sample |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
| Number of Replicate |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
8 |
| Mean RFU |
3858 |
6132 |
10503 |
17609 |
28071 |
41161 |
53533 |
| Standard Deviation |
579 |
769 |
1495 |
2307 |
3341 |
4203 |
4249 |
| Coefficient of Variation (%) |
15 |
12.5 |
14.2 |
13.1 |
11.9 |
10.2 |
7.9 |
> 回收率高：在80%~120%范围以内
|
System |
55 µg/mL of Pyrophosphatase
(n=2) |
20 µg/mL Thermostable Inorganic Pyrophosphatase (n=2) |
10% of (50mM Tris-HCl and 50% Glycerol) (n=2) |
1×Reaction Buffer (n=2) |
| Sample |
weight. (pg) |
Calculated weight. (pg) |
Ave % RE |
Calculated weight. (pg) |
Ave % RE |
Calculated weight. (pg) |
Ave % RE |
Calculated weight. (pg) |
Ave % RE |
| Sample 1 |
1.5 |
1.4252 |
95 |
1.3375 |
89 |
1.3319 |
89 |
1.4193 |
95 |
| Sample 2 |
0.2 |
0.1691 |
85 |
0.1683 |
84 |
0.1669 |
83 |
0.1839 |
92 |
| Sample 3 |
0.05 |
0.0437 |
87 |
0.0442 |
88 |
0.0461 |
92 |
0.0472 |
94 |
> 稳定性好：探针反复冻融3次，测试性能仍符合要求，灵敏度无降低，CV<10%
> 无交叉干扰：经验证，使用DNase Activity Assay Kit (Fluorescence)（Cat. No. ASE-A002）和RNase Activity Assay Kit (Fluorescence)（Cat. No. ASE-A001）检测同一样本核酸酶残留情况，无交叉干扰
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