背景
酶联免疫斑点技术（Enzyme Linked Immunospot Assay，ELISpot）是细胞免疫学中最灵敏的检测方法之一，可以在单细胞水平下完成对抗体分泌细胞（B细胞）及细胞因子分泌细胞（T细胞）的检测，能从20万-30万细胞中筛选出1个分泌相应蛋白的细胞。ELISpot的实验原理也是基于抗原抗体反应，可以看作是双抗夹心ELISA的延伸和新的发展以及单细胞水平的ELISA。ELISpot能够对抗原刺激后的活细胞进行功能性检测，具有较髙的特异性、直观且可信度髙等优点。
ELISpot是检测和评价疫苗引起细胞免疫效应的标准工具，目前广泛应用于感染性疫苗、肿瘤疫苗的临床阶段的药效学评估，在2020年国家药监局药品审评中心（CDE）发布的《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则（试行）》中推荐ELISpot作为检测评价mRNA疫苗的细胞免疫反应的技术。ELISpot除了应用在疫苗研究，还应用在免疫原性检测、药物筛选领域，免疫原性是影响CAR-T细胞扩增存续的关键因素，也是影响基因治疗产品安全性和有效性的重要因素，ELISPOT的技术是评估临床阶段细胞基因治疗产品安全性重要的指标参数。
ACROBiosystems百普赛斯始终为成为生物医药研发的基石企业而努力，依靠公司内部成熟且专业的研发团队，以及丰富的蛋白和抗体产品管线，我们在生物分析方法开发领域积累了丰富的经验和大量的实验数据。为助力疫苗研发、CGT领域发展，ACROBiosystems百普赛斯推出了ELISpot分析检测服务，我们可根据客户的不同需求，设计合适的检测分析方案，提供有效的方法学验证，出具个性化的分析结果报告，不仅可以为客户提供从头开始的一站式ELISpot分析检测服务，也可为有需求的客户提供读板服务。
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服务内容
ACROBiosystems百普赛斯应用德国AID酶联免疫斑点分析仪对ELISPOT板上各孔斑点图像进行全自动采集、计数及分析。我们可以根据客户需求，例如疫苗评价、药物筛选、免疫原性评估等，既可提供单纯的读板服务，也可提供一体化的分析检测服务。
ELISpot原理
免疫细胞在刺激物存在的条件下被激活，其分泌的细胞因子/免疫球蛋白被ELISPOT板底PVDF膜上（预包板）的特异性单抗捕获，去除细胞后，被捕获的细胞因子与生物素标记的单抗结合，其后二者再与碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶标记的亲和素结合，加入底物显色后，PVDF膜上出现紫色或红褐色的斑点表明细胞产生了细胞因子，通过酶联免疫斑点分析仪（ELISPOT Reader）对斑点进行自动计数和分析。
ELISpot检测T细胞原理示意图
ELISpot检测B细胞不同方法的原理示意图
ELISpot和ELISA的区别
| 区别点 |
ELISPOT |
ELISA |
| 测定对象 |
分泌某种细胞因子或抗体的细胞频率 |
样本中的某蛋白含量 |
| 样品类型 |
全血、PBMC、脾脏细胞 |
悬浮液/上清 |
| 样品板 |
96孔板- 底部覆有PVDF膜 |
普通96孔板 |
| 灵敏度 |
ELISPOT可精确到检测出几十万甚至百万个淋巴细胞中的一个活化细胞的细胞因子分泌。 |
较低，比ELISPOT低百倍 |
| 检测设备 |
AID ELISPOT Reader |
ELISA Reader |
| 检测方式 |
通过显色反应，在分泌细胞因子的位置显现清晰斑点，每个班点代表一个细胞，从而计算出分泌该细胞因子的细胞的频率。 |
通过显色反应，测吸光度，与标准曲线比较计算出可溶性蛋白总量 |
ELISpot分析检测服务流程图
服务范围
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案例分享
利用野生株S蛋白肽库刺激外周血单个核细胞（PBMC），检测刺激后T细胞免疫反应效果，可通过斑点数监测细胞因子的分泌情况。
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