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ACROBiosystems 百普赛斯ClinMax™基于流式细胞术Multiplex Bead Assay平台,经严格方法学验证,自主研发出不同细胞因子联合检测试剂盒,通过同一实验产生的标准曲线进行定量,旨在临床前、临床以及生产质控环节等提供全面的解决方案,为药物开发提供高效率、低成本的简便工具。

ClinMax™

可溶性蛋白(例如细胞因子,趋化因子,生长因子等)定量检测技术很多,如最经典的ELISA和WB等方法,但大多数的技术仅能对样本进行单一指标的检测,同时检测多个指标时则需要提供大量的样本分析检测,操作繁琐,还容易造成各实验间差异较大,尤其对于临床试验,由于样本量稀缺,容易无法满足多重检测,更无法满足重复检测。

ACROBiosystems百普赛斯ClinMax™结合流式细胞术和抗体包被磁珠高效检测分析物,开发出基于磁珠的夹心法免疫原理检测蛋白的试剂盒。相比ELISA和WB等传统单因子检测,该方法具有明显的样本使用量低、操作简单等优点。

单因子方法 多因子方法

样本量需求

≥600uL

10-50uL

时间

3-6天

0.5天

操作

简单易行

方法进阶

价格

低廉

性价比高

精密度

*以检测6种可溶性蛋白为例

ClinMax™基于流式细胞术的Multiplex Bead Assay原理:

1. 流式细胞仪可以根据磁珠不同荧光水平,将磁珠分开分析。在每种磁珠表面偶联不同分子的特异性抗体,将该磁珠作为捕获磁珠。当加入待检物后,不同的待检分子会特异性结合与之匹配的捕获磁珠。

2. 加入PE标记的检测抗体后,检测抗体会特异性结合捕获磁珠上的待检分子。

3. 最后用流式细胞仪进行PE信号的检测,根据标准曲线进行定量。

ClinMax™基于流式细胞术的Multiplex Bead Assay原理

原理示意图

ClinMax™ 基于流式细胞术的Multiplex Bead Assay
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    FAQ

ClinMax™ 基于流式细胞术Multiplex Bead Assay的产品优势

产品优势

样本少 - 检测样本用量低,仅需10uL样本;

时间短 - 检测时间短,一次实验即可测出多种细胞因子含量,支持一个工作日内重复;

步骤少 - 使用磁吸附,简单易行,减少离心操作,避免磁珠丢失;

检测范围宽 - 横跨4个数量级;

兼容强 - 对流式细胞仪适应性强,可与不同商家品牌流式细胞仪和多种分析软件配套使用。

通过使用标准蛋白信噪比筛选自研抗体对以满足试剂盒性能,在获得检测灵敏度符合要求抗体后,对细胞上清、血清、血浆等样本检测确定抗体对真实样本特异性识别;

抗体对选择

主要采用磁性微球作为分群载体,利用化学反应实现抗体与磁性微球共价键偶联,偶联后通过与标准批次比对确认抗体偶联量及批次一致性;

捕获磁珠

通过PE直接标记,降低生物素与亲和素反应可能带来的非特异信号;

检测抗体

采用磷酸盐缓冲体系,通过调节detergent浓度调节满足试剂盒样本中常见干扰物质如EDTA、血红蛋白等对检测干扰性。为降低试剂毒性采用proclin代替叠氮钠作为抗菌剂。

缓冲体系

ClinMax™ Human Th1/Th2 Cytokine Kit
(Flow Cytometry Multiplex Bead Assay)(Cat. No. FCM-C05R

ClinMax™ Th1/Th2细胞因子联合检测试剂盒(货号: FCM-C05R),能够一次性对细胞培养基、血清中的IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ进行定量检测,大大提高了科研人员的工作效率以及实现对稀少珍贵样品的多指标分析。

ClinMax™
典型数据
A representative scatter plot showing single bead population in P1 gate (left)

A representative scatter plot showing single bead population in P1 gate (left), the beads conjugated with analyte-sepcific antibody differntiated by APC fluorescence intensity (middle), and fluorescence signal in propotion to concentration of the analyte was measured for each cytokine in PE channel (right). Data was generated on Beckman Cytoflex S Flow Cytometer, equipped with blue laser (488 nm) and red laser (640 nm).

A double logarithmic fitting curve was plotted for each cytokine

A double logarithmic fitting curve was plotted for each cytokine (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-γ). The present curve of each cytokines was ranging from 9.8 pg/ml to 10000 pg/ml respectively.

批间一致性
The CV of 5 cell culture results with different 3 batches are lower than 20%

The CV of 5 cell culture results with different 3 batches are lower than 20%.(The IL-6 concentrations of cell culture sample II、III are lower than LOQ)

准确性验证
The recovery with 3 different concentrations

The recovery with 3 different concentrations(2500 pg/ml 、 625 pg/ml 、156.25 pg/ml) spiked into serum, plasma and cell culture are about 80%~120%.

FAQ

Q: 经过多步磁性分离后,磁珠沉淀越来越少怎么办?

A: 每次清洗时要缓慢小心地抽取上清液;在吸附时,增长孔板在磁力架上的磁吸时间,肉眼可见磁珠明显堆积在底部。

Q: 只提供一个板子,进行完一次实验后,其他孔还可以进行实验吗?

A: 建议用锡箔纸、封口膜等盖上未实验孔,避免灰尘等污染。

Q: 数据采集时,FSC-SSC散点图中观察到大量的碎片怎么办?

A: 适当增加FSC和SSC的阈值。

Q: 流式细胞仪检测范围宽,不需要调电压,每次需要上样PE和APC 补偿吗?

A: 要,上样PE和APC 补偿微球主要是为了获取合适的荧光信号,保证分群明显。

Q: 如何处理数据?

A: FlowJo可以FCAP,或用FCS导出,使用Graphpad处理数据。

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